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1.缓慢降温 缓慢冷冻的方法可使细胞内的水分渗出细胞外，在细胞外形成冰晶，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成所造成的细胞损伤； 很多细胞以每分钟下降1℃的速度，降至- 20℃冻结，均可获得满意的结果。但比较试验结果证明，此种恒定的致冷速度，并不是绝对的。当以每分钟下降5-24 ℃的速度冷冻时，原代细胞、二倍体和异倍体细胞保存皆良好。 常用逐级降温冷冻： - 20℃ -70 ℃ -196 ℃ 2.添加保护剂 目前常采用终浓度为5~10%亚油或二甲亚砜（DMSO）； 这两种物质在深低温冷冻后对细胞无明显毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高胞膜对水的通透性。 细胞冻存的基本步骤 二、细胞的复苏 基本原理与方法 细胞的复苏与冻存的要求相反，应采用快速融化的手段； 这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，以避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害； 一般将冻存的细胞冻存管直接投入37℃温水中，并轻轻摇动令其内容尽快融化。 细胞复苏的基本步骤 三、细胞的运输 培养细胞的交流、交换和购买已成为生命科学研究中一个重要工作，其中细胞的运输则是最为关键的环节。目前装运细胞的方法主要有两种： 冷冻储存运输： 利用特殊容器内盛液氮或干冰保存，保存效果较好，但较麻烦，且不易长时间运输，多需空运； 充液法 选择生长状态良好的细胞，可