结合聚合连接反应和磁性分离系统的单核苷酸多态性检测方法的建立.pdf

摘要 数方法由于受到检测灵敏度低，需要昂贵的实验设备及试剂，或需要专业操作人员等方 面的限制，无法在常规的临床检验中推广使用。 设计特定组成和功能的检测探针，建立了一种对SNP位点、短片段插入或缺失位 点进行分型检测的新方法。该法主要包括以下几个步骤：(1)对SNP位点所在片段进 分离技术的原理，使用链亲和素磁性微粒对含有检测位点等位基因特异性片段进行纯 化，减少反应体系中其它成分对后续分型检测的影响，进一步增强检测体系的特异性。 (4)对纯化后的等位基因特异性片段进行扩增以增加检测灵敏度；(5)通过琼脂糖凝 胶电泳、ELISA检测或通用寡核苷酸芯片技术三种不同方式实现分型检测。 琼脂糖凝胶电泳和ELISA检测实现的分型，不需依靠昂贵的检测仪器及试剂，即 可达到快速、特异性好和灵敏度高等特点，该法能够在常规实验室实现对肿瘤组织等不 均一样本进行低拷贝等位基因的检测。如果利用通用寡核苷酸芯片技术实现基因分型， 可以使用单色荧光标记系统，以简单的荧光扫描设备和简便的结果分析方法实现中、高 通量的SNP分型检测。 以苯二异硫氰酸酯(p·phenylenediisothiocyanate／1，4-phenylene 作为双功能交联剂，对氨基末端磁性微粒的表面进行修