二溴乙酸毒性和某市供水体系有机提取物致突变性的研究.pdf

复j忱掌99级博士生毕■渔二定 中文擅晏 二溴乙酸毒性和某市供水体系中有机物致突变性研究 中文摘要 饮用水质量与人体健康关系密切，随着工农业的发展，人口的增加，饮用水 的水源更容易受到各种污染，导致水源水中各种有机物前体物生成增加。氯化消 毒大幅减少了各种经水传染病的发生，但由于氯与水源水中有机前体物的反应生 成氯化消毒副产物，以上因素均直接影响了饮用水的质量。流行病调查已经表明 长期饮用氯化消毒后水与人群中消化道肿瘤发病风险增高有关。由于大部分致癌 物质均为致突变物质，因此我们使用配套短期致突变试验对某市供水体系中有机 物致突变性进行了两年连续研究。 二溴乙酸(DBA)是一种常见氯化消毒副产物，目前对其毒作用研究报道极 、少，考虑到二溴乙酸的同系物二氯乙酸和三氯乙酸均能对啮齿动物诱导肝肿瘤， 呵x訇热对其肝毒性和致突变性潜在致癌性进行了研究。 ／第一部分某市供水体系有机物致突变性研究 目的：分析某市水源水、自来水各采样点水样致突变性，为选择合适水源点 提供依据。研究方法：使用配套短期遗传毒性试验，包括Ames试验、小鼠体内 微核试验、非程序性DNA合成试验(UDS试验)，从不同检测水平对水样有机 提取物致突变性进行检测。结果：大部分采样点水样检测结果呈阳性，而拟建水 源点检测结果呈阴性。自来水水样致突变性大于水源水水样。结论：氯化消毒过 程增加了自来水的致突变性，而某市水源水中的致突变物可能也对自来水的致突 变性有影响。 第二部分二溴乙酸肝毒性与致突变性、潜在致癌性研究 第一节二溴乙酸体内肝毒性研究 目的：研究DBA对小鼠肝毒性作用，分析其毒作用机理。研究方法：以昆 明种小鼠为受试对象，检测急性染毒后LD50值，不同剂量、不同时相点小鼠血 清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的改变，肝组织 病理学改变，生化法检测小鼠肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、 的改变，免疫组化SABC检测C—los蛋白的表达。结果：小鼠LD50值为 值明显升高，病理学改变明显。剂量反应分析表明800mg／kg剂量可引起ALT值 明显升高，1600mg／kg剂量组染毒后1小时后小鼠肝组织中GSH含量下降为对 兰苎查竺望竺!圭兰!兰兰苎——!圭!!!一 对照组的3倍，染毒后3小时观察到C-fos蛋白表达明显。C-jun基因无明显改 变。结论：(1)小鼠血清AST和ALT改变以及病理学改变提示DBA具有肝毒性 作用 (2)．氧化损失可能是肝毒性的机理。(3)．C．10s基因表达的改变可能与GSH 合成的反馈调控有关。 第：■节二溴乙酸细胞毒性研究 目的：研究DBA对肝细胞毒性作用，分析其毒作用机理。研究方法：以人 肝癌细胞株HepG2为受试对象，于不同的时相点和剂量点，用MTT比色法和乳 酸脱氢酶释放法研究DBA的细胞毒性，使用DCFH—DA检测细胞内活性氧的生 成，OPT检测细胞内GSH含量的改变，Rh，123检测细胞线粒体功能的改变， Flu03一AM检测细胞内ca2+浓度的变化，并加入抗氧化剂等各种干扰物质观察其 对细胞毒性和细胞内氧化还原状态的影响。结果：MTT法和LDH法均表明DBA 具有细胞毒性，其毒作用呈时相和剂量反应关系，在lm∥ml剂量组染毒6小时 细胞死亡率为20％，1 mg／ml染毒后4小时细胞内活性氧生成明显增加，5小时 达到对照组211％，同时细胞内GSH含量下降为对照组的43％。细胞内ROS和 GSH的改变均呈剂量反应关系。前处理抗氧化剂M乙酰半胱氨酸fNAC)和去铁 敏(DF0)均抑制了细胞内ROS的增加，防止了GSH含量的下降，而且减轻了DBA 的细胞毒性。而前处理GSH合成抑制剂丁硫氨酸亚矾胺(BSO)和线粒体呼吸链 量下降，增加了细胞毒性。lmg／mlDBA染毒后7小时细胞内线粒体功能出现明 显下降，前处理环孢菌素A(CsA)对DBA所致的线粒体功能改变和细胞毒性均无 明显影响。而细胞内cd+浓度在lmg／mlDBA染毒后1小时即开始增加，并持续 至5小时，染毒后细胞内ca”浓度的改变也呈剂量反应关系。结论：(1)．DBA细 胞毒性与对细胞氧化损伤