黄盖鹅膏肽类毒素的分离纯化及其抗肿瘤活性的研究.pdf

黄盖鹅膏肽类毒素的分离纯化及抗肿瘤活性的研究 摘要 调查、子实体形态观察和不同温度PDA培养基进行菌种分离实验等生物学特性研究的 基础上，主要对该菌中的肽类毒素进行分离纯化，并进行了抗肿瘤活性的研究。 生物学特性研究表明，每年8月到9月发生子实体，子实体黄色，具有菌环和菌 托。子实体详细描述与杨祝良关于黄盖鹅膏的描述相同。黄盖鹅膏菌在PDA培养基不 同温度培养条件下生长极其缓慢。 应用高效液相色谱法，首次对黄盖鹅膏子实体不同干燥方法的甲醇粗提物进行检 测，同时对甲醇粗提物进行毒素的分离和纯化。分别用A和B两种洗脱液不同配比进 O-÷5％，A100％_95％；15--,35min,B5_÷80％，A95％_÷20％，； 脱梯度是：0,15min,B 35--,40min,B80％，A．20％；40～45minB．80-*100％，A 50,55min，B 的子实体的毒素含量相同，干燥方法不影响其毒素含量。 (2)分离纯化得到9种化合 物，经液相色谱、电喷雾质谱和核磁共振鉴定6种化合物。化合物l～6分别为；9．鹅 膏毒肽、a．鹅膏毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽、三羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼 笔毒肽。化合物7和化合物8由于含量少，只测得分子量都为131，化合物9分子量为 587，它们都不是已知的22种肽类毒素。 采用孙氏综合法，以灌胃和腹腔注射两种给药途径，对黄盖鹅膏的甲醇粗提物进行 急性毒性试验。结果显示以灌胃给药，剂量为600mg／kg，观察两周未见死亡，但是右 眼均失明。采用腹腔注射给药，测得半数致死量是65．4mg／kg。两种给药途径均发现粗 提物使昆明小鼠的肝脏有脂肪堆积。 。 应用MTT法，检测黄盖鹅膏中分离的羧基三羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽分别对 制作用。 首次选用H22荷瘤小鼠，对黄盖鹅膏甲醇粗提物和二羟鬼笔毒肽进行抗肿瘤体内实 验，以腹腔注射给予受试药。所有数据采用SPSSl4．0统计软件进行处理，结果表明鹅 43．48％，且具有一定的量效关系，和对照组相比无显著性差异。甲醇粗提物组与5-FU 组相比小鼠体重明显增加。通过对免疫器官的检测，表明甲醇粗提物对胸腺和脾有明显 增重的作用，说明对免疫器官有影响。二羟鬼笔毒肽对H22荷瘤鼠的肿瘤生长具有较高 二羟鬼笔毒肽和5-FU相比体重显著增加，与对照组和5．FU对比，二羟鬼笔毒肽能明显 增加H22荷瘤小鼠胸腺重量，说明对免役器官有影响。但解剖未发现器官有明显变黑现 象。说明其对免疫系统负殛影响较小。 总之，黄盖鹅膏甲酵粗提物应用高效液相分离纯化9种单体化合物，鉴定6种分别 为p鹅膏毒肽、a一鹅膏毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽、三羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和 二羟鬼笔毒肽。采用孙氏综合法，腹腔注射给予受试药，测得甲醇租提物半数致死量是 明，体外抗肿瘤实验单体化合物羧基三羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽，对SGC和 SMMC．7721细胞增殖均无抑制作用。甲醇粗提物和单体化合物二羟鬼笔毒肽对H22荷 瘤鼠有抗膊瘗活性，抑瘤率分剐为43．48％秘65．15％。 关键词：黄盖鹅膏，肽类毒素，MTT法，Hz2荷瘤鼠 II I-IPLC andPurificationtoxinandIt’SAntitumorEffectof Separation ofPeptide Amanita subjunquillea．S．1mai Abstract The ofAmanita from baimountainsWillsstudied biology subjunquillea．S．IIIlaiChang byfield observation anddifferentfrom PDAculturemedium．The observation，fruitbody’shape