灰色链霉菌二次生长及其whiG基因研究.pdfVIP

灰色链霉菌二次生长及whig基因的研究 摘要 r链霉菌是丝状多细胞土壤放线菌，土壤逆环境诱导链霉菌具有复 杂形态分化生命周期，获得合成大量有用次生代谢物能力。某些链霉 菌在液体培养基中表现独特的多相生长动力学特征：第一次对数生长 之后，细胞生长过渡性地停止，这个过渡期可能起着一个重要的发育 调控开关作用，启动细胞第二次对数生长。生理压力诱导特定RNA 聚合酶仃因子表达，指导适应性调控蛋白转录。途经双元件调控系统 和丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶的信号传导调控链霉菌的形态和生理分化。 whiG基因编码一个发育上重要的RNA聚合酶6因子，特异性地起始 一一一 发育程序，决定菌丝细胞的发育命运。 本研究通过测定菌液的OD．蹦o，发现并确证了灰色链霉菌存在二 次生长现象。生长过渡期开始于接种后19小时，持续3小时。实验结 果具有重复性。 通过PCR方法以灰色链霉菌总DNA为模板克隆到一个1Kb大小 编码278氨基酸残基，推测其蛋白产物是RNA聚合酶。因子。PCR 法克隆whig基因内部304bp片段，连接到大肠杆菌．链霉菌穿梭质粒 pLZl07。转化甲基化缺陷型大肠杆菌ETl2567。 f考察了影响原生质体形成和再生的因素。获得了灰色链霉菌原生 、 质体形成和再生的最优条件，即用YMPD培养基，加o．5％的甘氨酸， mg／mi，30。C保温1 30。C，200rpm培养40小时，溶菌酶工作浓度1 小时。在此条件下，原生质体制备量达109／ml。试验了几种不同链霉 率10％。) 多次尝试用pLZl07转化链霉菌原生质体未获成功。考察了几种 影响转化的因素。讨论了质粒DNA不能转化灰色链霉菌原生质体可 能的原因。 。因子二次生长一原生质体 关键词：灰色链霉菌whig基因 STUDIES ON GROWTHAND THEMGGENE OF ABSTRACT are multicellularsoil inwhich Streptomycesmycelial actinomycetes adverseenvironmentalconditionsinducea developmentalprogram differentiationcoordinatedwith morphological involvingcomplex afl useful of enormousof and secondary synthesis varietyinteresting insome metabolites．Developmentsystem Streptomycesspp．is an in medium． characterized kinetics multiphasic by unique growth liquid