一种调控脑胶质瘤表达B7H3的新MicroRNAMir3395p的发现及对脑胶质瘤细胞侵袭作用研究.pdf

第二部分 Mir-339-5p调控B7-H3对脑胶质瘤细胞侵袭的作用研究 2 一种调控脑胶质瘤表达B7-H3的新MicroRNA Mir-339-5p的发现及其对脑胶质瘤细胞侵袭作用的研究 中文摘要 中文摘要 脑胶质瘤是中枢脑系统最常见的恶性肿瘤，约占人颅内肿瘤的45%-60%，侵 袭性生长是脑胶质瘤的一个重要特征。肿瘤细胞这种侵袭性生长的行为限制了脑 胶质瘤局部治疗如手术切割和放疗等手段的可行性和有效性。因此探索脑胶质瘤 病理进程的分子机理和基于此的新靶点业已成为诊断和治疗脑胶质瘤的研究热 点。B7-H3是参与肿瘤免疫逃逸的重要负性B7家族分子，已有研究表明，B7-H3 分子在诸多肿瘤组织包括脑胶质瘤中存在异常表达，并与肿瘤生物学行为直接相 关。但是B7-H3在脑胶质瘤异常表达的调控机制以及其确切的临床意义尚不清楚。 MicroRNAs，一种非编码蛋白质的单链小分子RNA(大约22nt)，可在转录后水平 调控基因翻译，在脑胶质瘤细胞的生物学特性调控包括细胞增殖、转移侵袭、分 化及肿瘤干细胞等方面起重要的作用。有研究发现miR-29a 可以靶定B7-H3 3-UTR序列，并调控成神经细胞瘤细胞B7-H3 的表达。但是否存在其它调控脑胶 B7-H3 microRNA microRNA B7-H3 质瘤 的 ，并且 对 的调控在脑胶质瘤细胞侵袭 中的作用及机制还有待进一步的研究。 鉴此，本课题通过生物学信息方法预测和双荧光素酶报告系统检测相结合， 发现miR-339-5p具有调控B7-H3表达的作用，在此基础上分析其在脑胶质瘤组织 的表达及临床意义。并且通过体外转染miR-339-5p到脑胶质瘤U87细胞株，探讨 miR-339-5p调控B7-H3和脑胶质细胞侵袭的可能作用机制，为进一步探索脑胶质 瘤侵袭的分子调控机制及为临床靶向治疗提供理论依据。 本论文分为两个部分： miR-339-5p B7-H3 一 对 表达的调控和其在脑胶质瘤中的表达 及临床意义 【目的】：分析调控B7-H3在脑胶质瘤表达的mircroRNAs，并检测其对脑胶 质瘤表达B7-H3 的调控机制及临床意义。 【方法】：通过生物信息学的方法预测与B7-H33-UTR 序列存在结合位点的 I 中文摘要 一种调控脑胶质瘤表达B7-H3的新MicroRNA Mir-339-5p的发现及其对脑胶质瘤细胞侵袭作用的研究 mircroRNAs，并分析脑胶质瘤原位瘤模型的microRNA芯片数据，获得可能调控 B7-H3并在脑胶质瘤侵袭中起调控作用microRNAs，进而采用双荧光素酶报告系 统验证对B7-H3表达调节作用的miRNAs，实时荧光定量（RT-PCR）的方法分析 B7-H3 miRNAs 调控 的 在脑胶质瘤不同病理组织中的表达及临床意义。 【结果】：（1）microRNA在线预测 （网址）结果显示， B7-H33-UTR 20 microRNA 在 序列中存在 个不同的 结合位点，通过脑胶质瘤原 位瘤模型的microRNA 芯片数据分析，得出3 条较为特异性的microRNAs： miR-339-5p，miR-185-5p 和miR-539-5p。经双荧光素酶报告系统验证，发现 miR-339-5p可以直接靶定B7-H33-UTR 序列并下调B7-H3基因的表达，下调效 miR-29a B7-H3 2 PCR 果与已报导的 对 调控作用相似。（）实时定量 结果显示，脑 胶质瘤组织中miR-3