富勒烯衍生物对A549细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制.pdf

摘要 纳米科技的高速发展使得纳米材料被越来越多的应用在各个领域。富勒烯因 其独特的分子结构，优异的理化性质而受到人们广泛的关注。作为富勒烯重要成 员的C60和C，o，由于特殊的性质及易于制备、易于修饰等优点有望在生物医学 领域得到广泛应用。目前对于C60及其衍生物的生物效应已有较多研究，但有关 C70富勒烯还缺乏深入系统的研究。本文结合细胞生物学研究新进展，以人肺腺 癌细胞株A549作为模型细胞，着重探讨了C70富勒烯衍生物对A549细胞氧化 应激损伤的保护作用及机制，并与目前研究较多的C60衍生物作比较。主要研究 内容和取得的结果如下： 1．设计合成了三种富勒烯衍生物：C70丙二酸衍生物，羟基化修饰的C70和羟基 potential等 分析方法对制备得到的三种富勒烯衍生物进行了结构表征。表征结果表明， nm、35am、110 径大约为：70 nm，且粒径分布均匀，具有良好的分散性和 稳定性。 2．在H202诱导A549细胞氧化应激损伤模型基础上，以CCK-8比色分析法， Hoechst 33342荧光染色法分析了细胞活性变化情况；以活性氧捕获剂 DCFH—DA为标记探针，利用流式细胞仪检测A549细胞内ROS产生情况； 以Fluo．3 记探针检测细胞凋亡情况，来观察富勒烯衍生物对H202诱导A549细胞氧化 应激损伤的保护作用。结果显示，三种富勒烯衍生物具有良好的细胞相容性， 且可以抑制H202处理导致的细胞活性降低、细胞核固缩变小、ROS升高、 Ca2+浓度升高以及细胞凋亡。 3．探讨了富勒烯衍生物对A549细胞氧化应激抑制作用的机制。对A549细胞 检测，运用化学显色法对A549细胞的caspase一3活性变化进行分析，运用流 式细胞术分析了三种富勒烯衍生物对A549细胞线粒体膜电位的影响，同时 在体外研究了三种富勒烯衍生物对DPPH自由基的清除作用。结果显示：三 种富勒烯衍生物可以抑制H202处理所导致的脂质过氧化产物含量升高和抗 氧化酶活性降低，可以抑制H202处理所导致线粒体去极化以及caspase·3活 性升高，三种富勒烯衍生物都表现出对自由基的清除作用，效率大小为： C70(OH)34C60(OH)24C70(C(COOH)2)4。 关键词：富勒烯；C60；C70；抗氧化；富勒醇；氧化应激 II Abstract As andmaterialssciencehasmade nanotechnology rapiddevelopment， nanomaterialshavebeen in fields．Duetotheir chemical widelyappliedmany unique and featuresof activitiesoffullereneshavebeen physical C60，thebiological and inrecent membersofthe C60 recognizedyears．Asimportant fullerene，fullerenes of inbiomedicinefieldbecauseoftheir anabundance C70mayspark application featuressuchas and modificati