外源性导入抑癌基因FHIT对肝癌细Hep3B生长的影响.pdfVIP

■l哇—■囊■lJ地翻?文 外源性导入抑癌基因FHIT对肝癌细胞Hep3B生长的影响 博士研究生 许荣华 导师 易继林 教授 中文摘要 目的 histidinetriad 脆性组氨酸三联体基因(fragile gene，FHIT)作为抑癌 基因与肝癌的发生有关，且在肝癌细胞系Hep3B中存在FHIT基因染色体、mRNA 和蛋白的异常。本研究拟探讨外源性人FHIT的高表达对人肝癌细胞Hep3B生长 的影响。 材料和方法 1．用免疫组织化学5-p法检测46例肝癌及相应癌旁组织中脆性组氨酸三 科手术标本．其中男34例女12例，平均年龄56．3岁(18～72岁)。肿瘤平均 42例，一20ug／l有4例；合并乙型肝炎病毒感染的有40例，未感染者6例；所 有肿瘤标本经病理证实属高分化者14例，中分化者20例，低分化者12例；有 包膜的5例，无包膜的4l例；经手术证实有门静脉癌栓8例(均属低分化型)， 无癌栓38例；合并肝硬化35例，无肝硬化1I例。另选lO例因胆道手术切除的 部分正常肝组织为正常对照组织。参考近期国外文献方法观察NIIT蛋白的阳性 强度和阳性率，采用x2检验分析FHIT表达与临床资料的相互关系．另采用免疫 组织化学S-P法和图像分析技术检测了46例人肝癌组织及癌旁组织和lO例正常 frrEN基因在原发性肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及其与临床病理因素的关系。 2．构建一个包含人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的真核表达载体 试验、流式细胞仪分析技术检测细胞转染前后的细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡 的变化。 进行筛选14天。可见有抗性克隆形成，继续扩大培养获得混和克隆，用此混和 克隆细胞进行裸鼠背部皮下注射，试验分2组，每组6只裸鼠，用于接种转染 lX10个，观察各组试验动物成瘤情况．于接种后每隔3天观察一次肿瘤的大 小，21天后处死动物，剥离肿瘤，测量肿瘤大小并称瘤重，根据公式V--靠／6酽 ×L佃为宽度，L为长度)计算瘤体积，以接种转染空载体的细胞组为对照，结果 进行统计学分析． 结果 (63．04％)。正常肝组织与癌旁组织中均无FHIT蛋白的丢失．46例肝癌组织中 例表达为强阳性(13．04％)。肝癌组织中FHIT基因表达水平与肝癌大小、甲胎 蛋白高低、是否有无包膜，是否合并乙肝病毒感染及肝硬化无明显关系；而与肿 瘤组织分化有密切关系(x 脉癌栓有密切关系。 2． —k蹄寞圭肇位健·走 速度明显减慢，尤其是达到对数生长期后更加明显，差异有显著性(尺O．05)； 流式细胞结果表明Hep3嗍IT细胞G：／M期及S期比例明显下降，Q／G．期比例明 显增加，凋亡细胞率也明显高于对照组和空质粒转染组(尺0．05)。 3． 动物试验结果显示，所有试验动物均有大小不等的肿瘤生成，转染 验，P分别为0．017和0．022)。 结论 1． F}IIT基因蛋白在正常肝组织及癌旁组织均为阳性表达，显著高于在肝 癌中的阳性表达。FHIT基因蛋白的丢失与肿瘤是否有门静脉癌栓、肿瘤组织分 化程度明显相关，与肿瘤大小、有无包膜、甲胎蛋白是否阳性、是否感染乙型肝 炎病毒、是否合并肝硬化等因素均无明显的相关性。FHIT基因蛋白缺失在肝癌 组织中是频发事件。FHIT基因蛋自在肝癌中缺失与肝癌临床表现及预后的关系， 尚须大量研究证实。另FHIT和”硎基因蛋白缺失在肝癌组织中是频发事件。FHIT 和PTEN与肝癌的病理分级、合并门静脉癌栓有密切关系． 2．FHIT基因通过诱导肿瘤细胞Hep3B发生凋亡并导致其发生Gl期阻滞在 肿瘤基因治疗方面发挥作用。 【关键词]肝肿瘤；基因治疗；脆性组氨酸三联体 丰+辛}■陕孽峨