NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞亚群克隆异质性与肿瘤干细胞的实验及研究.pdf

NCI．H446人小细胞肺癌细胞株细胞亚群克隆异质性 与肿瘤干细胞的实验研究 博士生姓名：文加斌 指导教师：张 阳 教授 专业名称：中西医结合临床 摘 要 背景 随着肿瘤干细胞研究的深入，越来越多的证据表明除白血病外，乳腺 癌、肾癌、脑肿瘤也存在肿瘤干细胞，肺癌等实体瘤也可能存在肿瘤干 细胞，但肺癌肿瘤干细胞研究相对滞后。动物实验模型提示肿瘤干细胞 的存在。犬的正常支气管上皮没有II型肺泡上皮，但II型肺泡上皮细胞可 出现在重度不典型增生和侵蚀性病灶中。II型肺泡上皮存在增殖分子标 记物Ki267和增殖细胞核抗原(PCNA)，提示其可能是支气管癌的多潜能 干细胞。2005年Kim等报道支气管肺泡干细胞很可能就是肺癌的源头。 他们在非小细胞肺癌小鼠模型从小鼠肿瘤的最初阶段分离到这种干细胞， stem 并将其命名为支气管肺泡干细胞(brochioalveolarcells，BASCs)．他 cell 们利用流式细胞仪筛选发现，BASCs表达干细胞抗原Scal(stem celladhesion endothelial molecule，PECAM／CD31)和CD45，即具有 于静止状态，当体内支气管和肺泡损伤时发生增殖。BASCs表现出明显的 自我更新特性，能够分化成其它类型的肺上皮细胞，表现出于细胞的特性。 他们认为BASCs是远端肺上皮的干细胞，可能局限于支气管Clara细胞和 肺泡I型及II型细胞。在K—ras基因突变活化的终未支气管和肺泡上皮 的不典型增生和腺瘤中，可以观察到BASCs数量明显增加，提示BASCs可 能是肺腺癌的起源细胞(亦即肿瘤干细胞)。Maziers等证实了在肺癌细胞 信号转道通路中存在与上述干细胞相似的Wnt过渡表达，非经典途径JNK 通路激活和Writ拮抗剂WIF一1的抑制和失活调节作用。 黄盛东等研究A549J]市癌细胞株中肿瘤干细胞与克隆形成的关系，观 察克隆形态是否与肿瘤细胞的不断自我更新相关。他们将A549肺癌细胞 株单细胞悬液接种到96孔板，观察克隆形成率和克隆形态及传代情况， 测量克隆大小，计数细胞数目，分别观察早期、中间和晚期的黏附细胞 数目，检测其细胞增殖活性和细胞免疫表型，结果发现A549肺癌细胞株 可形成3种类型的克隆集落，其中Holoclone型占总克隆数的4％，克隆体 积大，可连续传代20代以上，并可分化为其他两种类型的集落，增殖活 性不随时间延长而降低，并表达干细胞标记，认为A549肺癌细胞株 Holoclone型克隆集落存在不断自我更新的肿瘤干细胞。董强刚等研究人 activatedcell 肺腺癌干细胞分离及鉴定，采用磁性细胞分选(magnetic sorting，MACS)技术将肺腺癌细胞分成多个亚群，然后应用流式细胞及 致瘤性。结果在A549和SPC．A肺腺癌细胞中发现一个新颖的癌细胞亚 群，此类癌细胞的表型特征为CD24+IGF一．1R+，具有高侵袭性和高 致瘤性，在NOD．SCIDdx鼠中仅需移植1OO个细胞即可形成肿瘤，其致瘤 能力是上述标志阴性细胞的1000倍。此外，这些细胞表达胚胎干细胞标 似小鼠肺脏细支气管肺泡干细胞(bronchioalveolarstemcells，BASCsl， 并具有自主生长特性，能够在无血清条件下长期培养。他们认为人体肺 腺癌中CD24+IGF一1R+细胞属于BASCs样癌干细胞。 当前肿瘤干细胞相关研究中细胞表面标志物是分选肺癌肿瘤干细胞 的关键。研究显示白血病肿瘤干细胞、脑肿瘤肿瘤干细胞、毛细血管瘤、 前列腺癌肿瘤干细胞均表达CDl33分子，肿瘤干细胞可能与正常组织于 细胞有相似的表面标志物，Hilbe等在非小细胞肺癌内皮祖细胞发现 CDl33分子表达，肿瘤中的内皮祖细胞可能来源于肺癌的肿瘤干细胞。由 此推论肺腺癌肿瘤干细胞亦可能存在与BASCs相似