第十二章 氨基酸类药物 2课时.ppt

工艺路线(397)： 工艺过程： 菌种培养：大肠杆菌的培养，斜面培养基为普通肉汁，摇瓶培养基为（%）：玉米浆7.5、反丁烯二酸2.0、MgSO4.7H2O 0.02、氨水调pH6.0，煮后过滤；500ml三角瓶中装培养基50-100ml，接种后37℃、250rpm过夜培养，逐级放大至1000-2000L，用1M盐酸调pH5.0，升温到45℃保温1h，离心收集菌体，备用。真菌类过程相似（p280） 细胞固定：E.coli细胞的固定，取湿菌体20kg，加生理盐水搅匀，保温至40℃，再加40℃保温的12%的明胶溶液及1%戊二醛溶液，充分搅拌均匀，放置冷却凝固，再浸于0.25%戊二醛溶液中；于5℃过夜后，切成3-5mm的立方小块，浸于0.25%戊二醛溶液中5 ℃过夜、蒸馏水充分洗涤，滤干得含天冬氨酸酶的固定化E.coli，备用。假单胞菌体固定（固定含L-天冬氨酸-β-脱羧酶细胞，见p280，自己看看） 生物反应堆的制备：将固定好的含有相应酶的菌体细胞装填于一定的床式反应器中，制成相应的生物反应堆。 转化反应：将反应底物延胡索酸（1M、保温37℃ ，含1mM MgCl2，pH8.5）按一定流速流过反映器I，使转化率达到最大（＞95%），转化液用于分离纯化L-Asp。转化液也可以进一步进入反反应器II，同时加入磷酸吡哆醛（0.1mM），并调pH6.0，保温37℃，反应转化为L-Ala。