第十四章 基因工程与蛋白质工程.ppt

第十四章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程 一、基因工程定义及主要内容 基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分子克隆. 是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的微生物等. 是生物工程的重要内容之一. 主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得； 2、构建DNA重组分子； 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定； 4、基因的表达. 构建DNA重组分子 工具酶 目的基因的制备 克隆载体 DNA分子的体外重组 工具酶 限制性内切酶是基因工程中最主要的工具酶 DNA连接酶（DNA ligase）、DNA聚合酶Ⅰ（DNA polymeraseⅠ）、末端转移酶（terminal transferase）、逆转录酶（reverse transcriptase）、核酸酶S1（nuclease S1）和核酸外切酶Ⅶ（exonucleaseⅦ） 限制性核酸内切酶 由Smith在1970年从流感噬血菌中发现. 细菌体内有特异的限制修饰系统，这种修饰系统是通过特殊的修饰酶在细菌本身DNA的特异识别序列处进行甲基化修饰，从而与外源DNA相区别。这样，限制性核酸内切酶就能去切割破坏外源DNA，而对本身无影响。 目前已从原核生物中分离出