《miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.》.pdf

· 1222 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9) miR．19b对 HepG2细胞增殖和凋亡的影响 曹 静，贾振亚，范文洁，徐 碉，范璐璐，孙国平 摘要 目的 研究miR一19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影 1．1．1 细胞株 人肝癌 HepG2细胞株购 自中国科 响。方法 根据前期miRNA芯片结果提示丹皮酚处理后人 学院上海生命科学院细胞库，本课题组冻存。 肝癌HepG2细胞的miR一19b表达增加 ，采用 qRT—PCR验证 1．1．2 药品及试剂 丹皮酚注射液购 自上海第一 丹皮酚处理HepG2细胞的miR一19b表达改变；将 hsa-miR- 制药厂(规格 10mg／2ml，批号990402)；四甲基偶 19bmimics瞬时转染 HepG2细胞，采用 qRT—PCR验证转染 效率，MTI比色法检测转染后细胞体外增殖抑制率，TUNEL 氮唑盐(nYr)购 自美国Sigma公司；高糖 DMEM培 染色和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 qRT-PCR验证 养液购 自美国Gibco公司；胎牛血清购 自杭州四季 62．5mg／L丹皮酚处理人肝癌 HepG2细胞24h后 miR一19b 青生物工程材料研究所 ；胰蛋 白酶购 自江苏碧云天 差异表达明显。过表达miR一19b可以抑制HepG2细胞增殖 生物技术研究所；PI试剂盒购 自美国BD公司； 和促进其凋亡。结论 丹皮酚作用可以引起肝癌细胞 miR一 TUNEL染色试剂盒购 自德 国 Roche公司；Lipo— 19b表达出现差异性表现。过表达 miR一19b可能是丹皮酚 抑制 HepG2细胞增殖和促进凋亡作用的部分机制。 fectamine 2000、TRIzol购 自美 国 Invitrogen公司； 关键词 肝癌 ；HepG2；丹皮酚；miR一19b；细胞凋亡 hsa-miR一19bmimicsf5一UGUGCAAAUCCAUGCAAA 中图分类号 R282．71；R735．7 ACUGA．3)、阴性 对 照 (5．UuCUCCGAACGUGU— 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)09—1222—05 CACGUTF．3)、Hairpin．it miRNAsRTPCRQuanti— tationKit及 U6snRNAReal—timeRT—PCRNormaliza— 微小 RNA(microRNAs，miRNAs)是真核生物中 tionKit均购 自上海吉玛制药技术有限公司。 广泛存在的一类约含有22个核苷酸的非编码单链 1．1．3 主要仪器 Nacpo-6100CO2培养箱 (美国 小分子 RNA，功能是在转录后水平调控基因的表 杜邦公司产品)；YJ．1450型医学净化工作台(苏州 达。异常表达的miRNAs与肿瘤的增殖、分化、凋亡 净化设备公司)；IX-70荧光倒置式显微镜 (日本 0一 和转移有着密切的联系。近年研究…提示 miRNAs lympus光学工业株式会社产品)；EL301Stripreader 广泛参与到中药抗肿瘤的作用过程中，从 miRNAs 酶标仪 (美国Bio-Tek公司)；EPICSXL—MLC流式细 水平探讨中药的抗癌机制为肿瘤临床治疗提供了新 胞仪(美国贝克曼库尔特公司)；GL-20A全 自动高 的依据和