《MiR-486-5p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的影响.》.pdf

《现代免疫学}2014年第 34卷第 1期 MiR一486—5p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的影响 黄馨萍 ，侯晋 ，沈筱芸 ，陆海娟 ，罗小玲 (1．广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，南宁 530021；2．第二军医大学医学免疫学国家重点实验室，上海 200433) 摘要：本研究旨在探讨肝癌中miR一486—5p的表达及其对肝癌细胞生长的影响。首先，通过qRT—PCR对4O例肝癌患者的肝 癌组织及其癌旁组织、以及肝癌细胞系 (QGY一7701、QGY一7703、BEL一7404、SMMC一7721、Huh7、HepG2和PCL／PRF／ 5)进行 miR一486—5p表达水平的验证 ；然后，合成miR一486—5p模拟物及其阴性对照物NC，分别转入上述七种肝癌细胞，采 用CCK8试剂检测miR-486—5p对肝癌细胞生长的影响；最后，采用流式细胞术检测miR一486—5p对肝癌细胞周期和细胞凋 亡的影响。结果显示 ，与miRNA第二代高通量大规模平行测序(miRNomesMPSS)结果一致 ，miR一486—5p在肝癌组织和肝 癌细胞中显著低表达(Pd0．05)。CCK8检测结果表明，转染miR一486—5p模拟物能有效、稳定的抑制上述七种肝癌细胞的 生长 (Pd0．05)。流式细胞仪检测发现 ，过表达 miR一486—5p能促进肝癌细胞凋亡 (QGY一7703细胞 ，P0．001；QGY一 7701细胞 ，Pd0．01)，及诱导细胞周期阻滞在G1期 (Pd0．01)。研究结果表明，miR一486—5p在肝癌组织中低表达；重建 肝癌细胞 内miR-486—5p的表达，可有效诱导肝癌细胞周期阻滞和凋亡，从而抑制肝癌细胞生长，提示 miR一486—5p可能在 肝癌 的发生发展 中起着重要作用 。 关键字 ：肝癌 ；miR一486—5p；细胞周期 ；凋亡 中图分类号：R593 文献标志码 ：A 文章编号：1001—2478(2014)Ol一0007—07 microRNA(简称 miRNA)，是近年来发现的 MPSS)发现，在肝癌组织中有许多异常表达 的 一 类长约 19—25个碱基 的非编码单链小 RNA，被 miRNA，尤其是miR一486—5p在肝癌miRNomes表 认为是表达调控领域的重大突破 。它能够通过完全 达谱中呈现较一致的异常低表达_6]，提示其可能在 互补和不完全互补的方式靶向作用于mRNA 的3’ 肝癌的发生发展中起着重要作用。因此，本研究旨 非编码 区域 (3’untranslationregion，3’UTR)， 在对miR一486—5p在肝癌 中的表达作进一步验证， 从而降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻 并探讨其对肝癌细胞生长的影响及机制，对 miR一 译，在转录后水平上对基因实现负调控作用 。目前 486—5p的功能作初步研究。 认为，人类体 内至少含有 30 的基因表达受miR— 1 材料与设备 NA调控 。越来越多的证据表 明miRNA参与肝 癌细胞增殖 、凋亡、转移 ，血管生成和肿瘤干细胞 1．1 组织样本 本研究的样本均来 自广西医科大 形成等生物学过程 ]。因此，研究那些在肝癌中 学附属肿瘤医院，为在肝胆外科住院治疗的肝癌患 异常表达的 miRNA及其调控 的靶点显得极其重 者经手术切除的肝癌组织及癌旁组织标本，肝癌组 要，它为进一步揭示肝癌新的潜在机制和寻找有效 织及对应的癌旁组织来源于同一肝癌患者。这些组 的治疗靶点提供理论基础。 织标本在手术切除后，立即冻于液氮中保存 ，直至 我们先前开展的正常肝组织 、肝炎肝组织、肝 被取出用于RNA抽提 。所有组织样本的获取均已 硬化肝组织和肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcino— 取得患者的知情 同意 。 ma，HCC)组织的miRNA的第二代高通量大规模 1．2 细胞系 人肝癌细胞 系 HepG2、Huh7、 平行测序 (massivelyparallelsignaturesequencing， PCL／PRF／5、 SMMC一7721、