《PAX6对肝癌细胞HNF1α基因表达的调控作用.》.pdf

· 646 ChinJGastroentero1．2Ol3，Vo1．18，No．11 论 著 · 术 PAX6对肝癌细胞 HNF10(基因表达的调控作用 张蓝天 丁晨虹 汪培钦。 张 新 华东理工大学生物工程学院’(200237) 第二军医大学附属长征医院消化内科 背景：前期研究显示肝细胞核因子 1OL(HNF1)在人肝细胞癌(HCC)中表达下调，上调HNFlc~表达可显著抑 制HCC细胞增殖和小鼠肝脏原位移植瘤生长。然而HNF1eL在 HCC中表达下调的机制仍有待明确。目的：探讨 HCC细胞中HNF1xI基因表达调控的分子机制。方法：应用 JASPAR软件预测HNF1xI启动子上潜在的转录因子结 合位点。联合应用含HNF1xI启动子的报告基因系统荧光素酶活性检测和点突变技术，研究JASPAR软件预测的配 对盒基因6(PAX6)对HNF1ot启动子转录活性的影响；以染色质免疫共沉淀实验检测 PAX6与HNF1 启动子的相 互作用，实时荧光定量 RT—PCR(qRT—PCR)和蛋白质印迹法验证 PAX6对 HepG2细胞内源性HNF1仅表达的影响； qRT．PCR检测 PAX6、HNF1o【在人 HCC组织样本中的表达，并以Spearman等级相关系数分析两者间的相关性。结 果：PAX6可直接结合至HNF1 的启动子区域，在转录水平促进 HNF1 表达。人 HCC组织中PAX6表达明显降 低，并与HNF1仅表达呈显著正相关 (r=0．7530，P0．0001)。结论：PAX6可调控HCC细胞中的HNF1仅基 因表 达，其表达下凋可能与 HCC的发生、发展有关。 关键词 肝细胞核因子 1ot； 启动子 ；PAX6转录因子； 转录，遗传 ； 癌，肝细胞 Regulation ofHNFlotGent Expression in Hepatocellular Carcinoma Cellsby PAX6 ZHANG Lantian ，DING Chenhong ，WANGPeiqin，ZHANGXin ．SchoolofBiotechnology，EastChinaUniversityofScienceTechnology， Shanghai(200237)；DepartmentofGastroenterology，ChangzhengHospital，TheSecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai C0rrespOndenceto：ZHANG Xin，Email：zhang【68@ hotmail．eom Background：Previousstudyshowedthathepatocytenuclearfactor1alpha(HNF1 )wasdown—regulatedinhuman hepatocellularcarcinoma(HCC)tissue，whileforcedre—expressionofHNF10[significantlysuppressedtheproliferationof HCCcellsandgrowth oforthotopicliverHCC nodulesinimmunodeficiencymice．However，themechanism ofHNFlct down—regulationinHCC remainstobeelucidated．Aims：Toinvestigatethemolecularmechanism ofregulationofHNF1d geneexpression inHCC cells．M ethods：TranscriptionfactorspotentiallybindingtothepromoterregionofHNF101was predictedbyJASPA