基因敲除的新方法CRISPRCAS系统.ppt

本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 NordriDesign中国专业PowerPoint媒体设计与开发 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可（ 简称“CCPL” 或 “许可”） 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利，就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下，许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 NordriDesign中国专业PowerPoint媒体设计与开发 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可（ 简称“CCPL” 或 “许可”） 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利，就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下，许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… 基因敲除的新方法： CRISPR/CAS系统 王晓玥 生物化工 2012207251 背 景 CRISPR ： Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats * 一、 CRISPR位点 * CRISPR Sequences 一、 CRISPR位点 前导区 定位：第一个重复序列上游 功能：启动子 特点：AT富集 * 重复序列 24-48bp 二重对称，类似发卡结构，但不是回文结构 重复次数最高可达250次 被间隔序列隔开 间隔序列长度与细菌种类及CRISPR位点有关 图1：CRISPR位点结构图(A代表CRISPR位点；B代表整个CRISPR/Cas系统) 二、CAS基因 Cas ： CRISPR-associated * crRNA:沉默RNA，对外来基因起到作用 Peter C Fineran, et al. Memory of viral infections by CRISPR-Cas adaptive immune systems Acquisition of new information. Virology,434(2012) Cas蛋白作用于整个过程中： Cas1 类似核酸结合酶 Cas2 类似核酸内切酶 Cas3 类似解旋酶 图2：CRISPR/Cas系统中Cas蛋白的作用 反式调控crRNA(tracrRNA)与crRNA配对形成双RNA结构 定位于双链DNA并使之断裂失活。 * tracrRNA crRNA DNA断裂 John van der Oost. New Tool for Genome Surgery.Science,339,768(2013) Le Cong, et al. Multiplex Genome Engineering Using CRISPR-Cas Systems. Science, 339,819(2013) 图3：crRNA作用位点示意图 CRISPR/Cas系统作用位点 作 用 机 制 * 图4：CRISPR/Cas系统作用机制：遗传记忆过程 实 例 * 图5：不同基因敲除方法得到的结果电泳图 Peter C Fineran, et al. Memory of viral infections by CRISPR-Cas adaptive immune systems Acquisition of new information. Virology,434(2012) * THANK YOU ! 定位 * Le Cong, et al. Multiplex Genome Engineering Using CRISPR-Cas Systems. Science.,339,819(2013) 图2：不同区段加入核酸定位信号后的cas9定位 免疫作用：通过对外来同源的DNA作用对噬菌体有抗性，影响质粒连接 * Streptococcus thermophilus * * PAM：protospacer adjacent motif * S.Pyogenes：化脓性链球菌 Spcas:经过密码子优化的cas9 NLS：核酸定位信号 * 广泛 We codon-optimized theS. pyogenes 化脓性链球菌Cas9 ( SpCas9 ) and RNase III ( SpRNaseIII ) genes NLS：核酸信号分子 SpCas9:经碱基优化后的化脓