吸烟对呼吸道上皮细胞上皮钙粘附素表达影响与机制探讨.pdfVIP

回凌匡抖盍堂：熊±堡壅圭堡塞============一 吸烟对呼吸道上皮细胞上皮钙粘附素表达的影响及 其机制探讨 中文摘要 f f f吸烟可以引起慢性支气管炎和肺气肿，进而导致慢性肺源性心 脏府。慢性支气管炎首先破坏气道粘膜屏障的完整性，其病理变化 为假复层纤毛柱状上皮变性、坏死、脱落。尽管吸烟已证实为慢性 obstructive 阻塞性肺疾病(chronic pulmonary 致病因素，但其致病机制尚未完全明了。上皮钙粘附素(E—cadherin， E—cd)是维持正常上皮细胞极性和形态完整性的重要粘附分子。我 们复制吸烟动物模型，体外培养小鼠气管环，并首次建立了体外猪 气道上皮细胞培养的方法，从体内和体外两方面，运用免疫组织化 学和分子生物学方法，观察吸烟对呼吸道上皮细胞E—cd表达的影响， 并研究细胞因子白细胞介素1p(interleukin1．p，IL．1 p)和肿瘤 necrosis 坏死因子o【(tumor factor一0【，TNF。c【)及酪氨酸激酶抑 制剂tyrpho 表达的调控作用，探讨E．cd在吸烟所致呼 吸道上皮损 作用及调控机制，为COPD防治提供新的 实验依据和 四部分： 第一部分吸烟小鼠呼吸道上皮细胞上皮钙粘附素表达 厂 的研究 ／ 目的研究E—cd表达变化在吸烟小鼠呼吸道上皮细胞增殖重建 知的作用。 ＼方法用自制的烟雾吸入箱复制吸烟小鼠动物模型。取同一部 位气管及肺组织制成冰冻切片，采用免疫荧光染色和原位分子杂交 方法，检测不同阶段吸烟小鼠呼吸道上皮细胞E．cd表达的动态变化。 —— 回盗医塾奎堂：堕圭堑壅圭堡塞 ：= 并应用免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分、 布。制作半薄和超薄切片，在光镜和电镜下动态观察吸烟小鼠呼吸’ 道上皮的形态学变化。 结果小鼠吸烟4w时，呼吸道上皮变性、坏死，细胞间连接松 散，同时伴有基底细胞肥大、增生，E．cd表达明显下调，与正常对 r 照组比较差异显著，而PCNA阳性细胞率为正常对照组为5．97倍 (PQ001)。吸烟8w时，呼吸道上皮完整，杯状细胞增多，细胞间 连接正常，E．cd表达上调，PCNA阳性细胞率比吸烟4w时明显减 少。各组间呼吸道上皮细胞内E—cdmRNA含量无明显变化。 结论 (1)呼吸道上皮细胞损伤时，膜上E．cd表达下调，使 细胞间连接松散，细胞增殖，有利于修复。(2)修复趋于完成时， ／ E-cd在呼吸道上皮细胞膜上重新表达，细胞连接恢复正常，细胞增／ 殖减弱。(3)E．ed表达变化发生在翻译后水平。 ／ 第二部分香烟烟雾提取物对动物气道上皮细胞上皮钙 粘附素表达的影响 的观察香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞E—cd表达 ，探讨其表达变化在吸烟所致气道上皮细胞的损伤修复中所 用。 法体外培养小鼠气管环，并采用细菌蛋白酶消化法收集培 养猪气道上皮细胞，加入一定浓度的CSE，应用免疫组化染色和图 像分析检测气道上皮细胞E—cd的表达。制备人E。cd cDNA探针，以 分子杂交，并定量检测各组气道上皮细胞E．cd mRNA的含量。 结果 正常气道上皮细胞中E—cd表达于相邻上皮细胞连接处