达坂喜盐芽孢杆菌D-8-%27T-四氢嘧啶合成基因的克隆、功能表达和谷氨酰胺转运蛋白基因的克隆.pdf

摘要 氏阳性中度嗜盐菌。根据革兰氏阳性菌四氢嘧啶合成基因ectABC的蛋白氨基酸的保守序列，设计 序列测定和Blastx比较，获得了ect,qBc基因的部分DNA片段。然后将经过地高辛标记试剂盒标记 kbDNA片段。对该序列进行ORF编码框分析。结果表明存在7个方向不一致的ORF编码框，依次 和42186Da。分析表明启动子可能的．10X41．35区与大肠杆菌的o”因子依赖的启动区有很大的相似 性，而控制全细胞抗性压力的o。因子在菌株m81ectABC基因上游的启动区中却没有被发现。 ect4BC基因在结构上比其它物种的更加紧凑。把重组质粒pMxBl∞c6凹c转化到大肠杆菌 (Escherihiacold ER2566中，在1．13培养基中，于25℃条件下培养4小时后，用IPTG进行诱导过 夜，然后提取细胞内的相容性溶质。13CNMR检测发现在图谱上存在四氢嘧啶相对应的波峰。 本实验设计了～种适合菌株D-8_1生长的合成培养基(SSDM)，该菌株在SSDM生长的总盐浓 度范围约为3％到加％，其最适宜的总盐浓度为5％到15％。实验发现，菌株D．81最适合的碳源为甘 油和葡萄糖，面蔗糖、甘氨酸甜菜碱、山梨糖、脯氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺等有机物质也可以作 和G10中能够