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三种蔬菜病害病原体的分子特征分析和分子检测研究 王娜 摘要：番茄和黄瓜是我国广泛栽培的蔬菜种类，若受到病害的侵染，则严重 影响其产量和质量。其中番茄灰霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜白粉病是栽培地较为常 见的病害，发生普遍且危害严重，其病原体均为真菌，在发病初期以常规方法难 以诊断，常由于诊断的不及时而造成严重后果。 cinema)，黄瓜霜霉病的病原菌为古 番茄灰霉病的病原菌是灰葡萄孢(Botrytis cubensis)。黄瓜白粉病的病原菌据《中国真菌 巴假霜霉病菌(Pseudoperonospora cucurbitae)和 志，白粉菌目》记载存在两种，分别为瓜类单囊壳(Sphaerotheca 葫芦科白粉菌(Erys啦he 大学农业与生物学院植物病理研究室形态鉴定为Sphaerothecafu，iginea。 本项课题从病原菌入手，分析、筛选番茄次霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜自粉病3 种病原菌种特异的分子特征，并建立和评价了分子检测的方法，通过研究取得的 主要结果如下： I．扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的rDNA．ITs，其序列长度为424bp， 为部分ITS2。4个地理株问的序列除ITSl区存在3个位点改变外，其他区域无差 异。灰葡萄孢的rDNA．ITS序列与其lO个近缘种进行比对，结果显示：灰葡萄孢 豆葡萄孢、Botrytis 全相同；与Sclerotinia tetraspora相比则有8个位点差异：与其余7个近缘种的差 3．扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的28S—D3，所获序列长度为243bp，灰 tulipae的也完全相同；而与 葡萄孢4个地理株的序列完全相同，与Botrytts Sclerotinid minor、 porri仅有1个碱基差别，与Sclerotinia tetraspora、Botrytis Sclerotinia trifoliorum有2个碱基差别。 4．建立了番茄灰霉病的PCR分子渗断方法，并对浚方法进行了灵敏性和特异 性评价，结果显示引物p729+／p729一所扩增条带对灰葡萄孢均为特异，病原菌为 0．2嵋时即可获得诊断。 70 存在碱基差异。 3个地理株的序列完全相同，无碱基差异，生物信息学分析提示本研究的黄瓜白粉 cucurbiatae，与形念鉴别的结果存在矛盾，可见上海市 病病原菌应为Sphaerotheca 包括我国的黄瓜白粉病病原菌的种类鉴别需进一步澄清和确定。 关键词：番茄灰霉病黄瓜霜霉病黄瓜白粉病分子特征诊断 注：本课题是马雅军教授承担的“上海市科学技术委员会科技攻关计划(03dzl9314)” 项目的一部分，全部实验是在第二军医大学病原生物教研室完成．特此声明。 Il MolecularCharactersand DetectionofThree of Pathogenic Fungi Diseases Vegetable Na