环境污染物PFOS引起血脑屏障通透性增高机制研究.pdf

，+一～～一一～、 } 中文论著摘要 j …一一～…。一’ 环境污染物PFos引起血脑屏障 通透性增高的机制研究 刖 置 机化合物，被广泛应用于生产表面活性剂、化妆品、农药和药品等。不粘锅、 食品包装袋的内表面、部分洗发香波、沐浴露、肥皂、洗涤剂中均含有PFOS。 最近的研究表明：PF0s的环境污染范围和污染程度远远超出了人们的预 想。2001年，它被列为美国环保局持久性环境污染物黑名单之列，将进行 严格管理。 美国、日本、中国非职业人群血清浓度分别为34．9¨g／L、50斗g／L、54¨g／L， 血清和组织中也检出了PFOs。生态环境中广泛存在的PF0s污染已成为 人们关注的焦点。另外，PFOS有在环境中和生物体内不产生降解、生物蓄 积性强等特点。因此，PF0s作为新的持久性环境污染物，对整个生态系统 及人类健康都将产生极大影响。 已有文献表明：PFOS能引起实验动物体重减轻，肝肿大，脂质代谢和能 量代谢障碍，胚胎毒性和潜在的神经毒性。目前尚未发现PF0s对血脑屏 障的通透性有影响的报道。因此，开展本研究探讨全氟辛烷磺酰基化合物 (PFos)对血脑屏障通透性的作用及其分子机制，以便对该污染物引起的脑 发育疾病提供干预靶点。 方 法 1．辣根过氧化物酶(HRP)透过血脑屏障(BBB)模型的透过率及跨内 transendothelialelectricalresistance 皮细胞电阻(111e TEER)的测定：利用 ·1· 型，不同浓度PFOS作用于HBMEC30分钟，检测HRP透过BBB模型的透 定TEER值 2．细胞间紧密连接蛋白ZO—l及细胞骨架蛋白F—actin的荧光染色：培 养正常的HBMEC，不同浓度PFOS作用于HBMEC30分钟，利用免疫荧光 染色的方法检测细胞间紧密连接蛋白ZO一1及细胞骨架蛋白F．actin的变 胞问紧密连接蛋白ZO一1及细胞骨架蛋白F．actin的变化 性抑制剂Y27632作用于HBMEC 30分钟后，不同浓度PFOS作用30分钟 游信号分子P13K特异性抑制剂LY294002作用于HBMEC30分钟后，不同 于HBMEC HBMEC HBMEC 间，测定HRP透过率及TEER值 4．免疫荧光染色的方法检测各种抑制剂对细胞间紧密连接蛋白ZO．1 制剂Y27632作用于HBMEC30分钟后，不同浓度PFOS作用30分钟及 501xMPFOS作用不同时间，利用免疫荧光染色的方法检测细胞间紧密连接 子P13K特异性抑制剂LY294002作用于HBMEC30分钟后，不同浓度PFOS 分子P13K特异性抑制剂Wortmannin作用于HBMEC30分钟后，不同浓度 ·’· 不同时间，细胞间紧密连接蛋白ZO一1及细胞骨架蛋白F．actin的表达无明 HBMEC 间，细胞间紧密连接蛋白ZO-1及细胞骨架蛋白F—actin的表达无明显改变； PKC特异性抑制剂G06976作用于HBMEC30分钟后，不同浓度PFOS作用 架蛋白F-actin的变化与不加抑制剂时的变化一致；PKC特异性抑制剂 G06983作用于HBMEC 30分钟后，不同浓度PFOS作用30分钟及 F．actin的变化与不加抑制剂时的变化一致。 5．信号传导通路的研究： 5．1 Cofilin／P-Cofilin、AKT／P-AKT的Westernblot检测结果：不同浓度 在各时间点均无明显改变；不同浓度PFOS作用于HBMEC30分钟，AKT／ 分钟表达最强，而后又呈减弱趋势；不同浓度的AKT／P—AKT上游信号分子 P13K特异性抑制剂LY294002作用于HBMEC30分钟后，50¨MPFOS作用 30分钟，Western 上游信号分子P13K特异性抑制剂Wortmannin作用于HBMEC30分钟后， 50I上MPFOS作用30分钟，Western 对PFOS引起的AKT／P．AKT