三株大型真菌的发酵条件优化及其胞外多糖的结构与功能研究分析.pdfVIP

FERMENTATIoN oPTIMIZATIoNAND STRUCTURE．ACTⅣITY oFEXTRACELLULAR POLySACCHARIDEINTHREE MACRo FUNGUSES ADissertation Submitted totheGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements of forthe ofMasterScience Degree By LiuShuai Supervisor：Prof．WangLinsong Prof．Xu Chunping May2014 IIIIIIl UlHIl UlIIIIlUlIII Y2550593 摘要 关于真菌多糖的研究方兴未艾，部分珍稀的野生大型真菌不断有相关研究与报道， 银杏多孔菌(Fomitopsissp．)、小孑L硬孔菌[Rigidoporus 齿耳菌(Steccherinum 外多糖结构与功能研究方面，尚未有相关报道。本课题以这三株大型真菌为研究对象， 在分子生物学水平上对采集于长白山山脉的银杏多孔菌进行了菌株鉴定，并对三株真菌 进行了摇瓶与液体深层发酵实验，通过液体深层发酵培养，收集了胞外粗多糖，纯化处 理得到精制多糖，通过傅里叶红外变换、气相色谱、热重、刚果红及特异性粘度实验等 检测手段，预测了多糖分子的结构与组成，通过DPPH法、邻二氮菲法进行了胞外多糖 抗氧化实验。结果如下： l、种属鉴定 采用ITS技术，对银杏多孔菌进行分子生物学鉴定。将获得的ITS基因序列提交至 杏多孔菌在内的这些ITS序列进行初步比对，并构建系统发育树，结果证实该大型真菌 属于拟层孔菌属。 2、液体深层发酵实验 通过5L三联罐液体深层发酵实验，初步探索了三株大型真菌在液体发酵条件下胞外多 糖与菌丝干重、显微形态特征及流变学特性，结果发现菌丝球形态学与流变学存在相互 影响、相互制约的关系。 3、胞外多糖的纯化、结构与功能研究 CL一6B凝胶柱 通过过滤、醇沉收集胞外粗多糖，再经Sevage法除蛋白、Sepharose 层析，获得精多糖。(1)红外分析表明，除了典型的多糖吸收峰外，银杏多孔菌胞外多 糖存在吡喃环和羧酸基团；小孔硬孔菌胞外多糖存在a和p糖苷键；大肉齿耳菌存在B ．葡萄糖醛酸及甘露糖结构。(2)气相分析表明，银杏多孔菌胞外多糖主要ant-l：喃甘露 由葡萄糖组成，占比98．05％。(3)通过热重分析实验可知，三株大型真菌胞外多糖在 验，小孔硬孔菌胞外多糖可以与刚果红形成络合物，证明其高级结构中存在三股螺旋的 无规线团链构象，而银杏多孔菌与大肉齿耳菌胞外多糖不存在这一结构。(5)乌氏粘度 计测定胞外多糖的特异性粘度，发现银杏多孔菌、d,