广东道地药材广藿香的GCMS化学指纹图谱和DNA指纹图谱的研究.pdfVIP

广东道地药材广藿香的G-C-MS化学指纹图谱和DNA指纹图谱研究 广东道地药材广藿香的GC．MS化学指纹图谱 和DNA指纹图谱研究 中文摘要 目的：广麓香Pogostemon 广藿香的干燥地上部分是其药用部位，味辛，微温，归脾、胃、肺三经，具 有芳香化浊、开胃止呕、发表解暑的功能，用于湿浊中阻，脘痞呕吐，暑湿 倦怠，胸闷不舒，寒湿闭暑，腹痛吐泻，鼻渊头痛，是治疗暑湿感冒的良药， 并且是30多种中成药的组分之一。广藿香原产东南亚菲律宾、马来西亚、印 度等国家，自宋代传入我国岭南地区，目前在广东省的广州郊区、肇庆地区、 湛江地区、广西以及海南岛、福建、台湾等地均有栽培。根据产地的划分， 广藿香药材的商品分为牌香(石牌藿香，广州产)、肇香(肇庆产)、湛香(湛 江产)和南香(海南产)。不同产地的广藿香在形态和其它性状上都具有显著 的差别，此外，传统认为前两者是道地药材，质量优，供药用，后两者质量 较次，不供药用，仅用作提取广藿香油。广藿香自引入我国以来，形态上发 生了很大的变异，随着广州城市化的不断扩建，“石牌藿香”已经出现濒危的局 面，为了拯救优良品种，使其得到可持续性发展，本研究以不同产地的23个 广藿香样本作为研究对象，采用分子标记技术和化学分析手段相结合的方法， 明确广藿香的分子特征和化学特征，从而为鉴别广藿香的真伪以及道地性判 定提供可靠的依据，并为广藿香的种质评价体系提供合理的技术平台和科学 依据。 方法：研究内容分为四个部分：(1)首次采用加压溶剂提取技术 (pressurizedliquid 学成分，并运用GC．MS方法对其进行分析和测定。(2)基于18个样品的特征 峰，进行分级聚类分析，将18个样品分为不同的化学型并通过计算机辅助相 似性评价系统对三个类型进行了相似性的评价，建立了不同产地广藿香的指 纹图谱。(3)选取30条随机引物对不同产地的23个广藿香样本进行RAPD指纹 etY．C． 图谱分析，并将同属另外两种植物长苞刺蕊草【PchinensisC．Y．Wu Huang，PCH】和水珍珠菜[Pogostemon 作为外类群参与比较。优化RAPD条件后，从30条随机引物中选出5条多态性 n 中文摘要 并根据条带的差异进行聚类分析，构建不同产地广藿香的RAPD指纹图谱。(4) rRNA、matK 对不同产地的广藿香进行DNA序列分析研究，选取广藿香的18S 基因、ITS和5S非转录间隔区共四段序列进行检测，并通过对各样品迸行聚类 分析，考察其基因型和地理型相关性。 结果：(1)从广藿香中提取分离两个化合物广藿香醇和广藿香酮，并运 用GC．MS方法对不同产地的广藿香样品进行分析和鉴定，确定包括广藿香醇 和广藿香酮在内的10个特征性成分：B．广藿香萜烯、反．丁香烯、a．愈创木烯、 刺蕊草烯、D一愈仓0木烯、6．愈刨木烯、广藿香烯醇、广蓉香醇、环赛车烯和广 藿香酮。结果表明不同产地的广藿香中各化学成分的种类和含量具有明显的 差异。PLE和GC．MS的联合运用具有简单、快速、灵敏度高的优点。(2)基于 18个样品的10个特征峰的聚类分析，可将18个样品分为三个类型：广藿香醇 型、广藿香酮性以及基于两者之间的过渡型。通过计算机辅助相似性评价系 统对三个类型进行了相似性的评价，建立了不同产她广藿香的(3C-MS指纹图 谱。指纹图谱的建立有助于区分广藿香的替代品和伪品，也有助于对国内不 同地区的广藿香进行评价。(3)不同产地广藿香的RAPD指纹图谱研究表明， 长苞刺蕊草和水珍珠菜的RAPD条带与广藿香相比具有明显的差异，不同产地 的广藿香的RAPD标记也具有较明显的差异。将不同产地的广藿香进行聚类分 析，同属种间的PCH和PAU与广藿香各样品的相似系数较低，多数情况下聚为 G12、G13和G16聚在一起。(4)对广藿香的18SrRNA、matK基因、ITS和5S 非转录间隔区共四段序列进行检测，结果表明，不同产地的广藿香各段序列 具有位点的变异。其中18S rRNA、5．8S 位；ITS区序列(包含部分18S rR