血涂片制备和染色.pptVIP

复习 血液标本采集和抗凝剂选择 血标本： 全血：血细胞+血浆;临床血液学检查，血细胞计数、分类和形态 学检查 血浆：全血除去血细胞；血浆病理性和生理性化学成分的测定，内分泌激素、凝血因子（钙除外）、血栓和止血检查 血清：离体后血液自然凝固后析出的液体成分（除纤维蛋白原等凝血因子）；临床化学和临床免疫学检查，可见血浆与血清的主要区别是，血清中不含纤维蛋白原。 一、采血方法 静脉采血法 部位：主要是肘静脉。还可以在：手背、内踝、股静脉，幼儿可采用颈外静脉采血 注意事项:抽血时只能外抽不能内推，以免形成空气栓塞 部位：WHO推荐中指或无名指尖内侧为宜，耳垂采血受温度影响大；半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定。 采血步骤及注意事项：应严格实行一人一针制；穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。用消毒干棉球擦去第一滴血，以后流出的血液可以使用。 二、抗凝剂选择 抗凝：用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固 抗凝剂：能够阻止血液凝固的物质，称抗凝剂 乙二胺四乙酸（EDTA）盐 抗凝原理：螯合钙离子 使用方法：15g/L浓度EDTA 和血液 1：10 适用范围：血细胞形态、血小板计数。但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能所以不适合做凝血象检验及血小板功能试验 草酸盐 （sodium oxalate） 草酸钠 、草酸钾、草酸铵 原理：草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固 用范围： 凝血象检查 肝素（heparin） 原理：低浓度时抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成,还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应 适用方法： 1g/L浓度的肝素钠与血液 1：10 优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温 适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析 枸橼酸盐（枸橼酸三钠） 原理：螯合钙离子 使用方法：配成109 mmol/L的浓度和血液1：9 106 mmol/L的浓度和血液1：4 适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小） 3. 血液标本检验后的处理 血源性污染是医源性污染的主要来源之一，检验后的血液标本处理不当，其危害极大。对于检验完毕的血液标本首先要进行高压灭菌，然后再进行无害化处理。带有血液的检验器材要用消毒液浸泡。采血用的注射器要进行毁形、消毒并进行无害化处理。 四： 血液涂片制备 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。 血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、 寄生虫检验。 1：玻片的清洁 将载玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂、血膜洗去，自来水反复冲洗，必要时用95%的乙醇浸泡1小时，擦干备用。 新玻片常有游离碱质，用重铬酸钾洗液或稀盐酸（浓盐酸稀释10倍）浸泡24小时，再彻底洗涤。 使用玻片时，要手持玻片边缘，，以保持玻片干燥、清洁、中性、无油腻。 2、血液涂片制备 [血涂片质量评价] 均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧 注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚 一张良好血涂片的标准是：厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、边缘整齐、两侧及两头留有空隙，血膜长度约4厘米。 五、血液细胞染色 染料：生物学染色剂，将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜下观察结构。 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。 碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。 酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、 嗜酸性颗粒成分等。 复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料 细胞染色原理： 一般以它们的物理现象和/或化学现象为依据。 物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等 化学作用：1.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的