Fat-1转基因牛基础性地研究.pdf

摘 要 ω-3 PUFAs 对人类及其他哺乳动物的健康极其重要，富含 ω-3 PUFAs 可以调节 许多基因的表达进而影响细胞的增值、生长、凋亡以及细胞信号转导，上述这些作 用对动脉粥硬化、高血压、冠心病、精神疾病与各种癌症有重要影响。但是人类与 哺乳动物不能在体内合成 ω-3 PUFAs，需由食物中摄取来满足需要。Fat-1 基因编码 ω-3 PUFAs 脱氢酶，它是 ω-3 PUFAs 合成的关键基因，可以将 ω-6 PUFAs 转化为 ω-3 PUFAs，从而提高机体内 ω-3 PUFAs 的含量。本实验通过动物转基因技术将 fat-1 基因转入牛的基因组中，利用动物克隆技术产生 ω-3 PUFAs 的转基因牛。对转基因 牛中外源基因拷贝数的检测和对牛基因组表达影响的研究对认识 fat-1 转基因牛有 重要意义。本实验主要利用 Real-time PCR 技术与芯片技术分别检测了外源基因的 拷贝数和对牛基因组的影响。 本试验得到的结果如下： 1. 转基因阳性牛的检测 本实验首先用 PCR 法对两头转基因牛进行初步检测，然后再采用 Southern 杂交 技术做进一步的鉴定，结果显示两种方法得到了一致的结果，证明两头转基因牛是 阳性牛，可以进行后续试验。 2. 转基因拷贝数的检测 本实验采用绝对定量 PCR 法检测外源基因拷贝数。标准曲线为： 2 Log N=-3.16Ct+40.76 （R =0.994 2 ），两头转基因牛中外源基因拷贝数分别为 2 4.62±1.03，5.46±1.26 。 3. 外源基因对全基因组表达的影响 本实验采用基因表达谱芯片，将转基因样本与野生型对照组进行荧光分子标记， 然后同时与芯片进行杂交，通过分析两组样品与探针杂交的荧光强度的比值，来检 测基因表达水平的变化。结果显示 Fat-1 转基因牛与野生型牛共有 43653 个差异基 因，本试验选取 p-value ≤ 0.05 and fc ≥1 的差异基因进行分析，结果表明多不饱和 脂肪酸成分的改变影响基因的表达，并通过不同的机制影响生理活性和病理学过程。 关键词：fat -1；转基因牛；ω-3 PUFAs；拷贝数；Real-time PCR ；基因表达谱芯片 The basic study on the fat-1 transgenic cattle Abstract ω-3 PUFAs have been shown to play an important role in health. Enriched with ω-3 polyunsaturated fatty acids modulate expression of a number of genes with such broad functions as cell proliferation, growth and apoptosis and cell signaling and transduction, these effects, seem to regulate coronary artery disease, hypertension, atherosclerosis, psychiatric disorders and various cancer. However, human and mammals can not synthesize ω-3 PUFAs by themselves, so they obtain ω-3 PUFAs by dietary intake. Fat-1 gene encode ω-3 PUFAs desaturase, it play importance role in the synthesis of ω-3 PUFAs, which can convert ω-6 PUFAs into ω-3 PUFAs, then increase the content of ω-3