日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原诱导保护性免疫及研究.pdfVIP

生堕丛竺燃：堂壁 堕型塑丛一 日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原诱导的 保护性免疫研究 中文摘要 ，近半个世纪以来，国内外学者就致力于研究血吸虫病疫苗以预防血吸 虫病的感染及传播，并经历了死疫苗、活疫苗到基因工程疫苗等一系列探 索过程。目前已鉴定的血吸虫抗原分子超过100种，但它们诱导的免疫保 护力未达到研究的预期目的，因此寻找鉴定新的疫苗抗原分子成为当今血 防研究的重点中鉴于血吸虫表膜分子在致病及宿主免疫中起重要作用，本 文对同本血吸虫肝门型童虫表膜进行了如下研究。 一．日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原的免疫学研究。 击感染及雌虫生殖具有一定的抗性，减虫率为16．2％，减卵率为55．4％o＼) 二．日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原免疫兔血清被动转移研究11 目的是观察SjHmAg免疫兔血清被动转移至小鼠抗日本血吸虫感染的 确定抗体效价后经尾静脉转移给昆明鼠三次，每鼠每次0．5ml，第一次转 移后1h，每鼠经腹部感染40±l条si尾蚴，第二、三次在攻击感染后1、 卵率50．6％)的免疫保护效果。■ 三．噬茵体表达短肽模拟日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原表位的研究 从噬菌体随机12肽库免疫筛选SjHmAg的模拟短肽分子，探讨其抗 l 生i坠：丝塑鳖兰丝 堡兰兰!童!丝 疫筛选噬菌体l2肽库，按吸附一洗脱．扩增的淘洗过程进行三轮筛选：随 机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性，并进行测序：用混和噬菌体 克隆皮下免疫小鼠三次，分别在0、2、4周进行，第6周每鼠经腹部感染 40±l条同本血吸虫尾蚴，42天后剖杀冲虫，观察减虫及减卵效果。经三 轮筛选，特异性噬菌体得到有效的富集，产出率为第一轮的210多倍：随 血清特异性反应：自动测序仪测序，结果发现它们的外源肽具核心序列； 6．1 与对照组相比，混和噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为1 5％，减卵率为 59％。利用噬菌体展示技术可获得模拟SiHmAg短肽，这些短肽分子能诱 导部分抗日本血吸虫保护力。、L 四．日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原免疫兔血清筛选日本血吸成虫eDNA 文库， f筛选同本血吸虫特异性抗原基因，为血吸虫病疫苗的研究提供新的候 疫筛选：对获得的阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和DNA序列测定， 通过互联网将获得的序列送入NCBI 5 较，将发现的未知基因序列送入GenBank以获登录号。经三轮筛选共获l 个阳性克隆，这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示插入 的部分序列与sj线粒体基因显著同源，其它阳性克隆为未曾报道的sj新 性抗原分子，这些抗原分子可能具有抗sj感染作用。、I 本研究对SjHmAg蛋白组分及免疫学特征进行初步分析并成功制备了 l2肽库，获得7个具有核心序列的短肽分子，用混合阳性克隆免疫动物 取得了一定的免疫保护效果。同时用此血清对日本血吸虫成虫cDNA文 库进行筛选，共获l5个阳性克隆，其中6个已送GenBank获取登录号， 并对其中M1 5基因部分序列中开放阅读框架编码的蛋白分子的结构与功 能进行预测。这些工作为血吸虫疫苗的研究提供试验依据。■ 2 !!生丛．丝堑丝!笙 堑兰竺堕堡：生 onProtective withtheMembrane Studies Immunity ofSchistosomaHepato’portal Antigen japonicum