糖尿病肾病细胞外基质代谢失衡机制与药物干预及研究.pdf

中文摘要 糖尿病肾病细胞外基质代谢失衡机制及药物干预的研究 摘 要 目的：糖尿病肾病(diabetic mellitus，DM)最常见而严重的并发症，是终末期肾病的主要原因之一。 糖尿病肾病的病变特征为肾小球系膜基质积聚和基底膜增厚。细胞外基质 (extracellular 间的动态平衡。近年来的研究显示ECM降解能力下降在DN的发生、发 负责ECM降解的主要酶系， 型胶原的降解，而后者是DN中肾小球基底膜增厚和系膜基质堆积的主要 inhibitorof 而且关于MMP一2酶原的特异膜型激活因子一膜型基质金属蛋白酶．1 (membrane1-matrix 1．MMP)在DN中的表达 type metalloproteinase，MT 及作用鲜见研究。 tissue 结缔组织生长因子(connective growth 生长因子(transforminggrowth 其较强的致纤维化作用，且生物效应较单一成为DN研究的热点。目前有 关CTGF在糖尿病肾病ECM代谢障碍中的作用机制鲜有深入研究报道。 肾素．血管紧张素系统(renin．angiotensin 管紧张素II(angiotensinII，AnglI)的增加是DN发病机制中的关键环节， 抑制AngII的产生并干扰其作用是DN治疗的关键。厄贝沙坦是血管紧张 II I ATl 素II Ra)，其肾 antagonist， 1型受体拮抗剂(angiotensinreceptor 脏保护作用是否涉及细胞外基质代谢紊乱尚未见报道。 TGF．131诱导ECM代谢失衡在组织纤维化进程中具有关键作用。 TGF．131的各种生物效应是依靠其信号转导网络来实现的，其中最重要的 andMad 是Smads(Sma 具有较高同源性，在以往的研究中很难区分。RNA干扰(IⅢAinterference， RNAi)是近年发展起来的一种新型基因静默技术，该技术具有高度的序 中文摘要 列专一性，能简单、高效地阻抑特定基因的表达。 ， 本研究以糖尿病大鼠模型和体外培养的大鼠肾小球系膜细胞 cell，GMCs)为对象，从整体、细胞和分子水平， (glomerularmesangial 通路在糖尿病性ECM代谢失衡中的作用。通过厄贝沙坦对动物及细胞的 干预实验探讨ATlRa对肾脏保护作用的机制。 方法： 1．糖尿病动物模型制备及相关指标观察 切除术。2周后将大鼠随机分为三组：右肾切除对照组(n=18)，糖尿病 mg／kg溶 酸缓冲液，48h后尾尖取血，血糖仪测定血糖，尿糖试纸测定尿糖，血糖 芝1 生理盐水灌胃。厄贝沙坦干预组大鼠于给药12周后，对照组和DM组分 别于注射STZ后4、8和12周每组取6只大鼠，收集血尿标本，切取肾 脏，光镜观察。肾脏一般病理改变，免疫组化检测肾组织MMP．2、TIMP．2 和CTGF蛋白表达，以Western TIMP．2、MTl．MMP和CTGF的蛋白和mRNA的表达。 2．大鼠肾小球系膜细胞的培养和相关指标观察 基培养大鼠肾小球系膜细胞。细胞分为低糖组(LG组：5．5mmol／L葡萄糖)， 渗透压对照组(LG+M组：5．5mmol／L葡萄糖+24．5mmol／L甘露醇)，高 糖组(HG组：30 学、免疫荧光细胞化学、Western 中文摘要 IV型胶原的含量。 3．RNA干扰及相关指标观察