表没食子儿茶素没食子酸酯对酒精性肝病小鼠铁过载作用和机制及研究.pdf

生问题。ALD的发病机制复杂，涉及酒精及其代谢产物对肝脏的直接和间接损伤， 同时还与营养状态及遗传易感性密切相关。大量证据表明，氧化应激在酒精性 肝病的发病中起着重要作用，氧化应激由产生过多的自由基(超氧化物，过氧化 物，羟自由基)引起，可加速内在抗氧化剂(谷胱甘肽，维生素A、C和E)的消耗 或两者同时发生。几种内源性自由基的来源，包括线粒体，黄嘌呤氧化酶， 物肝脏中被证实。铁通过催化超氧化物和过氧化氢转变为更强有力的氧化剂， 如羟自由基或高铁自由基，或超高铁自由基的Fenton反应而引起氧化应激。这 些强有力的自由基．通过脂质过氧化反应及蛋白和DNA氧化引起组织损伤。大 量证据表明，铁在酒精性肝病中起着重要作用。在慢性消耗的酒精依赖个体中， 平均肝铁浓度大量增加，而且在酒精性肝硬化的患者中，肝铁摄取率增加。 对ALD的治疗目前尚缺乏特效手段，所用研究药物因副作用大而不能广泛 应用于临床，因此主要采用支持疗法，予高蛋白、高维生素、低脂饮食，补充 复合氨基酸、维生素类、微量元素锌，维持电解质及液体平衡等及对症治疗。 中文摘要 铁是生物体内最重要的脂质过氧化反应促进剂，铁可启动或催化Haber-weiss反 应，产生自由基破坏肝细胞的细胞器(主要是对溶酶体膜的破坏)，最终造成肝细 胞死亡。而肝细胞的死亡又会进一步加重肝铁过载，因为肝细胞坏死后，肝细 胞浆内的铁蛋白会被溶酶体消化，放出不溶性的含铁血黄素，由此形成恶性循 环。在这一过程中酒精和铁对肝脏具有协同的损害作用。我们认为打破这个恶 性循环的关键是改善或消除肝铁过载。 绿茶作为传统饮料的代表有利于人体健康。茶多酚、儿茶素是绿茶的主要 成分，它是一种多酚化合物，主要的儿茶素包括表儿茶素(EC)、没食子酸表儿茶 EGCG含量最高，占儿茶素的50％左右。EGCG作为茶多酚的主要单体及活性成 分，具有许多重要的生物功能，如抗氧化、抗炎、铁螯合及抗癌等作用的发挥 主要依赖于EGCG。研究表明EGCG对铁超载引起的机体损伤表现出良好的保护 作用，这种作用可能主要是通过以下两个方面来完成的：①抗氧化；②螯合金 属铁离子。大量实验证明，EGCG可以和铁参与的氧化体系中的铁离子发生作用， 从而达到抑制氧化反应的产生。 然而，关于茶多酚对酒精性肝病铁代谢异常的作用目前国内外尚无报道。 因此，本研究拟通过酒精灌胃建立ALDd,鼠模型，以腹腔注射给予EGCG的方式， 采取小鼠血清及肝组织标本，比较不同剂量EGCG作用下的小鼠肝脏病理变化、 血清√6岍，AST水平、血清铁，肝铁含量及肝组织SOD活性、MDA含量与模型 组小鼠之间的差异，观察其对ALDd、鼠模型的保护和治疗作用，采用Real—time PCR、Westem 用机制。 材料与方法： 恒湿条件下自由摄取食水，饲养一周左右开始实验。随机分为正常组(12只) Ⅱ +EGCG10mg／kg组；模型组+EGCG20mg／kg组；模型组+EGCG30mg／kg组； 模型组+去铁胺200 mg／kg组(阳性药物组)。药物均为腹腔注射给药，正常对 照组予等体积生理盐水腹腔注射，每日一次，持续4周。实验至第12周末，小 鼠禁食24h，剖杀，留取血及肝组织备检。血标本送检珠江医院检验科检测血清 ALT、AST及血清铁含量。将取材后的肝组织固定于4％多聚甲醛溶液，石蜡包 埋，51an切片行HE染色，光镜下观察肝组织病理形态变化。另取肝组织制备 10％组织匀浆，按试剂盒操作检测肝组织蛋白含量、SOD活性及MDA含量。剩 余肝组织置低温冰箱．80C冷冻保存，以Real．time mRNA PCR方法检测Hepcidin 表达水平，以Westernblot印迹分析Tf和TfRl蛋白表达水平。 结果： I．ALDd、鼠模型的建立 通过52％酒精灌胃的方法诱导ALD小鼠模型。结果显示，光镜下，正常对照 组可见肝小叶轮廓清晰，肝细胞以小叶中央静脉为中心呈放射状排列，肝细胞 索排列尚整齐，肝细胞呈多边形，细胞分界清，核圆，位于细胞中央，胞浆丰 富，呈嗜碱性：8周末模型组小鼠肝脏病理改变为中央静脉周围肝细胞索排列紊 乱，小叶界限不清，肝细胞胞浆中见大小不等较广泛空泡变性，以中央静脉周 围为主，有程度不等的小叶内及门管区灶