磷酸钙生物陶瓷对成骨细胞骨相关基因表达影响体外实验及研究.pdf

磷酸钙生物陶瓷对成骨细胞骨相关 基因表达影响的体外实验研究 生物医学工程 专业 研究生 王朝元 指导教师 张兴栋 接受临床骨修复患者的数量己仅次于输血患者，骨缺损己经成为威胁 人类健康的主要疾患之一。长期以来，用于骨组织修复的材料主要是自体 骨和·同利，异体骨。自体移植主要的缺点是来源极为有限，而且以伤治伤。 同种异体骨移植存在免疫性和供体传染疾病的危险。 磷酸钙陶瓷 c羚基磷灰石、磷酸三钙及轻基磷灰石/磷酸三钙复合材 料等)是一类典型的生物活性陶瓷。除具有良好的生物相容性外，磷酸钙 生物陶瓷还具有 良好的骨传导性并可与骨形成化学键合。近年来更发现具 有特定组成和结构的磷酸钙陶瓷还可诱导骨形成。 然而，磷酸钙陶瓷生物相容性和生物活性的机理至今尚未被充分阐明。 磷酸钙陶瓷的物理化学特征 (化学组分、孔隙、表面微结构，液流等)如 何影响成骨细胞的行为，特别是骨相关基因的表达尚未见报道。磷酸钙陶 瓷的物理化学特征如何影响成骨细胞骨重建相关的RANKL/OPG系统的表 达也未见报道。因此，本文试图通过定量检测体外培养于不同磷酸钙陶瓷 表面的成骨细胞的细胞增殖及骨相关基因在mRNA和蛋白质水平的表达， 研究不同磷酸钙陶瓷的物理化学特征对成骨细胞行为，特别是骨相关基因 表达的影响，以便更深入的了解磷酸钙陶瓷的生物相容性和生物活性。 成骨细胞的某些基因的表达对骨代谢具有十分重要的意义。它们是: 碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙蛋白，骨涎蛋白，骨桥蛋白和骨连蛋白。因为 它们与成骨过程密切相关，故被称为骨相关基因。在这些基因中，除了碱 性磷酸酶是一种细胞膜结合蛋白外，其他蛋白均为骨基质蛋白。 成骨细胞骨重建相关的RANKL/OPG系统对于成骨分化过程中的骨重 建具有十分重要的意义。成骨细胞RANKL/OPG信号系统的发现是20世纪 90年代末骨生物学研究领域的一个里程碑。OPG属于TNF受体超家族的成 员之一。OPG的配体是一个己知的TNF配体家族的成员RANKL。成骨细 胞合成RANKL和OPG，由于成骨细胞合成并分泌的OPG具有与破骨细胞 膜表面受体RANK类似的结构，因而可以与破骨细胞表面RANK竞争性的 结合成骨细胞分泌RANKL，从而抑制破骨细胞的活性和进一步成熟分化。 上述基因的表达对于自然骨发生、骨生长，骨折愈合及骨重建都具有 十分重要的意义，标志着骨的正常发生和形成。在正常的骨生成过程中， 这些基因的表达是受到严格的时序调控的。碱性磷酸酶和I型胶原一般在成 哥分化的早期高度表达，而骨钙蛋白和骨涎蛋白则在成骨分化的晚期高度 表达。上述骨相关基因在骨形成过程中的表达失控则可能导致骨生长发育 异常。 组织非特异性碱性磷酸酶主要在肝脏、骨组织和肾脏中高度表达。该 酶可以将磷酸脂降解产生Pi沉积于骨中。碱性磷酸酶在哺乳动物体内的功 能包括水解磷脂，调节磷代谢。细胞膜上的碱性磷酸酶不仅可以调控磷酸 根的转运，而且可以调控钙离子、脂肪、蛋白质、碳酸根的转运和Na/K泵。 1型胶原是骨组织细胞外基质的主要有机组分。它是骨中的有机基质模 板，限定了矿物晶体成核的位置和生长空间。 骨钙蛋白主要分布在骨和牙组织中。在骨发生和骨生长过程中，骨钙 蛋自对于骨组织中轻基磷灰石的形成过程具有抑制作用，对于骨组织的矿 化具有负调节作用。骨钙蛋白还可以和另外一种骨非胶原蛋白一骨桥蛋白结 合成复合物形式，这种复合物可促进骨的吸收。 骨连蛋白对细胞外基质蛋白之间的相互作用发挥重要作用。其分子结 构中含有钙结合位点，与骨组织的形成、分化和骨再建有着密切的关系。 骨连蛋白可与二价金属离子、几种类型的胶原分子以及轻基磷灰石结合。 骨涎蛋白与钙离子和羚基磷灰石都有强的亲和力。另外，骨涎蛋白除 可以与胶原蛋白共价结合，还可以诱导破骨细胞里的钙离子应答，促进破骨 细胞的骨吸收。 RANKL/OPG信号系统发现较晚，它的主要生物学功能被认为是调节 破骨细胞前体的分化，破骨细胞活性以及抑制破骨细胞凋亡，从而调控骨 重建。 生物陶瓷对成骨细胞行为的影响是多层面的。在细胞水平上，它可以 影响细胞的形态，豁附，增殖，迁移和分化等等。在分子水平上，它可以 影响细胞的基因表达。基因表达的调控可以发生在mRNA转录水平，也可 以发生在蛋白质翻译