载YC1脑靶向乳铁蛋白-海藻酸钠-胆固醇纳米胶束及研究.pdfVIP

摘要 载YC1的脑靶向乳铁蛋白一海藻酸钠．胆固醇 纳米胶束的研究 硕士研究生：郑思嘉 导 师：吴传斌教授 胡海燕副教授 专 业：药剂学 研究方向：缓控释与靶向制剂 中山大学药学院药剂学与制药工程实验室 摘要 目的：由于血脑屏障的存在，使得绝大多数中枢神经系统药物无法达到有效的脑 内血药浓度。因此，开发新型有效的中枢神经给药系统使药物达到有效的脑内浓度， 对中枢神经药物的运用显得尤为重要。 YCl是从中国南海唇软珊瑚中提取的氧代固醇类甾体化合物，有相关研究证明其 具有显著的神经元保护作用。但由于水溶性差，经小鼠尾静脉静注后脑内浓度低，治 疗效果不理想。本论文拟通过合成海藻酸钠与胆固醇的聚合物(SACD)，该聚合物在温 和条件下可以形成亲水性海藻酸钠在外，疏水性胆固醇在内的核壳结构的纳米胶束， 由于疏水区为胆固醇，这种纳米胶束对与胆固醇具有相同母核结构的甾体药物具有很 好的包载作用。然后在该纳米胶束上连接具有脑靶向性的乳铁蛋白，其进入体内后， 与血脑屏障上的乳铁蛋白受体结合，从而进入脑内，发挥神经保护作用。 方法：本实验采用经改进的三光气．DCC法，合成高接枝率的两亲性海藻酸钠一胆 摘要 等方法验证。通过萃取法和水解法两种方法测定SACD中胆固醇的接枝率。 通过酰化反应，使SACD的海藻酸钠上部分羧基与乳铁蛋白(LD相连形成 Lf-SACD，并通过Westernblot的方法验证酰化结果。 比较了直接法、乳化法和透析袋法制备纳米胶束的粒径大小和分布。由于乳化法 制备的纳米胶束粒径较小且均匀，故确定乳化法为制备方法。进一步研究用乳化法制 备纳米胶束的形态，比较载药前后纳米胶束的粒径和Zeta电位的不同。 例，合成出具有不同接枝率的SACD，研究不同接枝率与包封率的关系。 ST009进行全扫描，确定两者的选择性离子通道，以内标法建立YCl的体内外测定方 法。 通过考察模型药物YCl在各种有机溶剂中的饱和溶解度，选择50％的乙醇加1％ 法考察YCl体外释放度。以累积释放率较大的数据，采用零级方程、一级方程、Higuchi 放规律。 采用昆明小鼠进行载YCl纳米胶束的体内分布研究。经小鼠尾静脉分别注射 2h,4h,8h将小鼠处死，取出血、心、肝、肺、肾、脑进行匀浆处理，加入适量乙酸乙 酯漩涡混合后离心，取上清液氮气吹干。加入甲醇漩涡混合后离心，取上清液进样。‘ 他对照品有明显不同。采用萃取法能够准确地测定SACD的接枝率。 Westemblot结果表明，阴性对照品SACD没有呈现谱带，提示与乳铁蛋白抗体 摘要 SACD。 采用直接法制备的纳米胶束粒径分布不均匀，透析袋法制备的纳米胶束粒径较 大。采用乳化法制备的纳米胶束，纳米胶束粒径的大小在150nm以内，且分布较均匀。 载药后的纳米胶束粒径略微变大。Zeta电位载药前后均保持在．100mV左右。扫描电 镜可见SACD纳米胶束呈圆形核．壳状结构，纳米胶束分散性良好，粒径分布均匀。 于胶束的形成。收集0．13rain的洗脱液可以将载药物的纳米胶束溶液收集完全。胆固 醇的接枝率显著影响YCl包封率，YCl的包封率随着胆固醇的接枝率的增加而增大。 根据YCl在不同介质中的溶解度，分别采用6％的HP．p．CD水溶液和1％的 采用6％的HP．B．CD水溶液为释放介质，12小时累积释放百分率能达到80％以上；采 原因可能是因为乙醇在释放过程中有少量挥发，造成对YCl的溶解度降低。也有可 能是释放介质中表面活性剂浓度较高，产生增溶作用的胶束体积较大，不能自由透过 具有半透膜性质的透析袋而造成释放度过低。 以6％的HP．B．CD水溶液的累积释放百分率，采用各种模型对纳米胶束的释放行 释放方程为最佳模型。 组织和血浆分布实验结果表明，LF组的脑内YCl从0至8小时AUC显著高于 靶向评价结果显示，