低温防护处理异体骨软骨移植修复关节软骨缺损及研究.pdf

中文摘要 低温保护冻存的异体骨软骨移植 修复关节软骨缺损的研究 摘 要 目的：本研究的目的是观察异体骨软骨移植物在经 历低温保护冻存后修复关节软骨(Articular Cartilage， AC)的效果，并对两个不同处理组进行比较。 ／方法：实验动物选取3～4月龄新西兰大耳白兔。将 供体兔麻醉后，在严格无菌条件下行髌骨内侧弧形切口， 逐层打开膝关节囊，暴露股骨关节面，在内、外侧股骨 髁关节面上分别切取长方体骨软骨块，其关节面为宽3 mm。术 mm的正方形，AC及所带软骨下骨的全长约4 balancedsaltsolution， 中以汉克斯平衡盐溶液(Hank’S HBSS)湿润关节面。将所有移植物随机等分为两组，在 其中一组的关节面上用普通大头针造孔若干个，作为实 验组；另一组不造孔，作为对照组。将两组移植物经同 样的低温保护程序处理后，转入液氮中保存96小时以 上。进行手术植入时，按照移植物的组别将受体动物随 机等分为实验组和对照组。以取材时所用的手术方式打 开右侧膝关节囊，暴露股骨内侧髁关节面，切除局部骨 软骨组织，制做与移植物一致大小的新鲜缺损区。由液 氮中取出移植物，迅速置入37℃恒温水浴箱内复温2～3 分钟。再以HBSS冲洗3遍后，植入宿主骨床，轻轻摁 压，使之与周围组织紧密接触，检查膝关节活动度后， 逐层闭合伤口，不用外固定。术后将动物置笼中，以普 中文摘要 通颗粒饲料喂养。 丁．术后第4周及第8周}付分次处死动物，打开膝关 肖囊，暴露股骨末端，’莎即对移植物进行摄片，并观察 其整体塑形、色泽及有无裂隙、关1t蒯罔有无。目’赘形成 等。川纰彩{锯切取包含移植物在内的局部骨软骨块，再 取其，t，．，J、部分保存于一20℃冰箱中，Jfj作氨基酸分析； 余者固定丁10％甲醛中，用于制作切片。同时切取健侧 卜肢的股骨头及半月板，分别作为氨基酸分析时透明软 一 骨与纤维软骨的正常对照。将用于组织学检查的标本固 定24小时以上，然后以脱钙液处理3天，每天换液1次， 再以流水冲洗2犬后，进行常规脱水与石蜡包埋。用石 蜡切片机切成5pm厚的切片，漂浮法将切片贴附于清洁 载玻片一卜-，进行常规HE染色，中性树胶封片，光镜观 标准，用于移植物修复效果的定量评估。进行氨基酸分 析测试时，用锐利刮刀剔除移植物中的软骨，以同样方 法剔除留作透明软骨对照的健侧股骨头软骨，再将留作 纤维软骨对照的健侧半月板剪切为小颗粒状。将上述三 种软骨成分分别作为待测样品置入烤箱内充分烘干，加 入6N盐酸充分水解。后将水解液过滤、定溶及蒸干， ’ 卜氨基酸分析仪，测定羟赖氨酸及羟脯氨酸的含量，根 据其比值推测样品中胶原纤维的类型。对于两处理组lfl 软骨退变的形态学评分结果崩无参数的Wilcoxon检验， 对r氨基酸分析结果用单因素方差分析(ANOVA)及q 榆验(即NewmanKeuls法)处理。 结果：术后4周时人体观察町见两处理纠l动物的丁． 中文铺要 术关节活动度较好，很少有粘连、骨赘等并发症。修复 的关节整体观塑形良好，恢复原有轮廓。移植物关节醢 平滑有光泽，与周围界线模糊。术后8周时，两处理组 动物的手术关节活动度照好，未见粘连，且运动频度较 豳周时明显增离。修复的关节整体观塑形尚好，外观依 然平滑，僵移植物关节蕊显示出颜色变化，有的出现暗 红色斑块，有的部位里乳自色。 关子组织学观察，两个处理组的镜下表现同大体观 察一样难以辨别差异。术后4周时，可见移植物中软骨 细胞莹放射状排列，胞核形态基本正