羧甲基纤维素对角膜上皮损伤修复影响与机制探讨.pdfVIP

中文摘要 羧甲基纤维素对角膜上皮损伤修复的影响及其机制探讨 摘 要 粘性多糖，是人工眼泪的主要组分，能延长药物在眼球表面的停留时间。 研究表明CMC可以明显改善干眼症患者的临床症状，并且其效果呈剂量 依赖性。通常认为CMC可以延长药物在眼球表面的停留时间是由其物理 特性决定的，目前尚不知CMC是否可以直接作用于眼球表面，特别是上 皮细胞，从而影响角膜上皮损伤的修复。有报道认为CMC可以减低LASIK 术后眼球上皮损伤的发生率，也有人报道配戴隐形眼镜前滴加CMC滴眼 液具有细胞保护作用，减轻角膜和结膜充血，并且使眼部感到更为舒适。 尽管CMC发挥这些保护作用的确切机制尚不清楚，但这些研究提示CMC 可能参与眼球表面上皮损伤的修复过程。 closure 本研究将采用体外划伤愈合分析(scratch．woundassay)和动物 模型观察CMC对角膜上皮损伤修复的影响，并探讨其可能的机制。 方法：l、细胞培养：将复苏传代的人角膜边缘上皮细胞(human cornea--1imbal 2、体外划伤愈合分析：将HCLE细胞接种于预先用胶原I包被的8孔 腔式培养玻片上，制备体外细胞划伤愈合分析模型。利用图像分析软件系 统在不同位置测量划伤的平均宽度，计算划伤愈合的百分率并进行组间比 较。 96孔培养板上，孵育24小时后，加入含有不同浓度(0，0．02，0．2， 继续培养0、8、24和48小时。室温下放置2．5分钟，摇匀测定每孔的荧 光强度(波长485／535nm)，荧光强度的数值与每孔活细胞数成正比。 4、细胞迁移分析：将HCLE细胞接种于硅化处理的胶筒内，加入 la K．SFM培养基，置培养箱内培养至单层满汇合时，加入100M羟基脲 h，以阻止细胞增殖。去掉胶筒，用K．SFM (hydroxyurea)继续培养24 中文摘要 培养基洗涤细胞三次，再加入含有和不含有CMC的培养基继续培养24h。 培养结束后用Oiff-Quik试剂对细胞进行固定并染色，显微镜下观察细胞 迁移情况并拍照。 ‘5、细胞趋化分析：将HCLE细胞接种于上层腔式培养板内，然后置 ‘于下层腔式培养板内，加入含有或不含有CMC的K-SFM培养基，同时 加入含有2 置培养箱内培养12h。迁移至膜底的细胞用消化液溶脱掉，然后用裂解缓 冲液裂解细胞，加入荧光染料与细胞的核酸结合，用分光光度计测定荧光 nm)，荧光强度反映迁移的细胞数。 强度(波长485／535 6、细胞粘附试验：将HCLE细胞悬液接种于预先用纤维连接蛋白(5 lI la g／cm2)、I型胶原蛋白(10 IlL 不含有CMC的96孔板内培养4h。每孔加入lO WST-1试剂，孵育 2h，用酶标仪(450nlTl的波长)测定每孔的吸光度，粘附细胞的数目与 吸光度成正比。 7、动物实验：新西兰大白兔12只，在手术造模前2周除去双眼瞬膜， 随机分为实验组和对照组，每组各6只。在2组白兔的右眼角膜中央，制 成直径6．0mm的角膜损伤模型。对照组滴加PBS液，实验组滴加含1％ h采用角膜荧 CMC的PBS液，每日给药四次。分别于给药前和给药后24 J 光素染色的方法观察创伤愈合情况。利用计算机图像分析系统(Image 1．33)计算角膜上皮修复面积。 8、统计学处理：所有结果均以均值±标准差取±s)表示。应用 SPSS1 of