酶促有机化学反应.ppt

第五章 酶促有机化学反应 酶促研究化学反应的特点 高效性 选择性 条件温和 环境友好 需要解决的问题 反应类型少。 及能用于酶促反应的酶和底物少。 操作参数窄。 在有机溶剂中应用少。 易被底物和产物抑制。 酶制剂的选择与修饰 酶制剂：纯酶、粗酶、含酶细胞 酶状态：游离酶、修饰酶、微团酶、固相酶 选择因素：反应类型、反应条件、规模 修饰方法：表面活性剂、脂肪酸、单甲氧基聚乙二醇、右旋糖苷 目的：改变溶解性能，改变pH，加强酶和底物的相互作用。 如人工合成的类脂化合物(含有亲水性的五羟基己酰基和疏水性的十二烷基链的化合物)，可以通过亲水性的基因吸附在酶分子的表面．在经过冻干处理之后，疏水性的脂肪链可以使酶容易溶解在有机溶剂中。用该方法可以使酶催化效率提高数十倍 微团酶 活细胞中的酶大多数都处于水—有机介质的界面上，即生物膜的内外表面 微团酶是人们根据生物膜的结构和性质，设计的一种由水、表面活性剂和有机溶剂三种成分组成的微团结构，把酶和底物包在其中，借此模拟酶在活细胞内的功能 固定化酶 优点： a．可以重复使用； b．提高酶的稳定性； c．反应产物容易分离，无蛋白质污染； d．可以通过选择固定化方法改变酶的最适反应条件和反应的过程。 固定化方法： a.通过物理吸附原理将酶吸附在固体载体的表面： b通过使用双功能团试剂，将酶共价偶联在载体上 c包埋在微囊内。 酶催化的水解反应 水解酶特性： 种类多，丝氨酸蛋白水解酶：如胰蛋白面、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。可催化多肽、氨基树脂、羧酸酯的水解。 专一性不严、 正逆反应都能催化。 其他亲核试剂竞争。 水解酶的类型 类型： 酯酶：选择性：猪肝酯酶、马肝酯酶，高选择：乙酰胆碱酯酶。能选择性水解手性醇酯。 脂肪酶:能将甘油三酯水解成脂肪酸和甘油的酶。对一般酯中手性酸酯更有效。 界面激活作用:当溶液中底物浓度比较低的情况下，脂肪酪几乎不显示催化活性。然而，当底物浓度逐渐增加，超过它的溶解极限时，脂肪酶的活性明显增加。脂肪酶在临界胶束浓度下并不水解底物，但超过这个底物浓度表现出高活性。 蛋白酶：能识别并选择性地水解由L—构型氨基酸形成的肽键，具有比较广泛的底物适应性。能选择性地水解由L—构型羧酸所形成的酯。 糖苷水解酶：淀粉酶，纤维素酶，溶菌酶等。能水解由糖的半缩醛羟基与羟基脱水形成的糖苷键。能选择性地水解由D—构型单糖之间形成的糖苷键。 提高选择性方法 底物修饰：通过底物结构的修饰，可以得到更适合的底物，从而改进酶催化反应的选择性。适合所有类型的酶转化反应。 加入有机溶剂：在反应体系中加入与水互溶性有机溶剂如甲醇、叔丁醇、丙酮、二氧六环、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜等，可以改善酯酶催化反应的选择性。 对映体选择性抑制：某些手性碱(如某些胺和氨基醇等)的加入对脂肪酶的选择性有很大的影响。动力学研究表明，手性碱对脂 肪酶分子的作用是非竞争性抑制，即手性碱与酶的作用部位不是酶的活性中心而是调控部位。脂肪酶与这种非竞争性抑制剂结合后，对消旋化底物中两个对映体的催化作用影响显著不同，从而使酶的催化选择性得到提高。 酶催化的酯水解反应 酶催化的肽键水解反应 多肽键的完全水解，一般是应用酸催化水解法。 为了从多肽键中得到某一个肽链片段．则可以应用肽链内切酶选择性水解多肽键，肽链内切酶能够催化多肽链中的某一个肽键的水解断裂。这类酶对肽键类型有很好的选择性，所以人们可以选择适当的肽链内切酶有目的地在某 点上切断肽链。 另一类常用的是肽链外切酶，它的特点是选择性的将多肽链C—端氨基酸残基水解下来 酶催化的糖苷键水解反应 二糖的酶水解 应用α-葡萄糖苷酶可以将蔗糖水解成葡萄糖和果糖。 β-半乳糖苷酶是一种多糖外切酶。它能选择性地将多糖非还原性一端的葡萄糖水解除去。因此该酶在多糖结构分析中有重要应用价值。 淀粉的酶水解： α-淀粉酶 ：它是一种内切酶，以随机方式水解α-1，4—糖苷键。 β-淀粉酶 ，它是一种直链淀粉的端切酶，仅作用于链的末端单位。 葡萄糖淀粉酶 ，它是一 种外切酶，能够将淀粉链端基葡萄糖水解下来。 Α-l，6—糖苷酶：它是一种能特异性水解1，6—糖苷键的淀粉酶。 酶催化氧化还原反应 酶催化氧化还原反应特点： 1、整个反应过程是分步进行，每一步反应都由相应的酶催化，选择适当的酶，可以使反应停留在某一阶段。 2、反应过程中碳原子和氢原子的氧化，电子的迁移和质子的传递等过程，可以是非同步进行的。 3、反应过程中能量的释放或吸收也是分步进行的，因此反应能够在温和条件下进行。 氧化还原酶 与水解酶不同，氧化还原酶在组成上要复杂得多。氧化还原酶由酶蛋白和辅助因子组成。常见的辅助因子包括：辅酶，如NAD+，NADP+和FAD，FMN等；金属离子．如Fe、Cu等。这些辅助因子都直接