《SOX9和INSL3基因在克隆猪隐睾中的表达及甲基化模式 SOX9 and INSL3 Gene Expression and Methylation Patterns in Cryptorchidism of Cloned Pigs》.pdfVIP

2013年第49卷第11期 Geneticsand Breeding·遗传胄秘 表达及甲基化模式 顾晓龙1．2，徐 利2，韩 晓2，李 翔1，2，李芳芳2，戴建军2，曾宪垠P。张德福斧 (1．四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014；2．上海农业科学院畜牧兽医研究所， 上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室，上海201106) 摘 要：为查明本课题组所获得的体细胞克隆猪隐睾发生的可能原因．本研究采用相对荧光定量PCR技术和亚 硫酸氢盐测序法分析SOX9和INSL3基因在克隆猪隐睾中的表达量及其启动予区CpG位点甲基化状态。结果表 VS 明：除了SOX9基因在克隆猪C2中的表达量显著高于对照组N(1．82 基化程度没有显著变化，而INSL3基因启动子区在克隆猪C1和C2中的甲基化程度显著高于对照猪N(86．25％、 78．75％vs 其正常表达，由此推测这可能是导致克隆猪发生隐睾的重要因素之一。 关键词：甲基化；隐睾；亚硫酸氢盐测序；克隆猪 中图分类号：$828．2 文献标识码：A 通过体细胞核移植(SCNT)技术虽已成功获得发生【21。相比着床前的胚胎和克隆动物胎儿，目前对 多种哺乳动物后代，但SCNT获得的后代只有极少数克隆动物成体的甲基化模式研究仍然较少，造成后 能够存活，且存活的后代也常伴有不同程度的发育 代不同程度的发育缺陷和表型异常的分子生物学机 缺陷和表型异常。克隆动物后代的发育缺陷与表型 制仍不清楚。本实验以本课题组获得的2例有隐睾 异常被认为与其重构胚异常的重编程密切相关。重 症状的克隆猪睾丸为研究对象，比较了SOX9和，Ⅳ_ 构胚的异常重编程使得发育相关基因表达出现异 SL3基因在正常猪睾丸和克隆猪隐睾睾丸中的表达 常，最终造成克隆后代胎儿的异常、流产及成活后代 差异，并运用亚硫酸氢盐测序法(BSP)对其启动子 出现发育缺陷。DNA甲基化是表观遗传修饰的主要 形式之一，它对哺乳动物发育相关基因的正确表达 因甲基化模式与克隆猪隐睾发生的关系。 有着重要的调控作用。因此检测基因启动子区CpG 1材料与方法 岛甲基化状态是揭示某基因正常或异常表达常用方 1．1 法之一。SOX9基因位于SRY正下游，负责协调哺乳 实验材料 以巴马小型猪胎儿成纤维细胞系 动物睾丸形成，它表达于成年支持细胞，具有促进精 为供体细胞，进行核移植生产克隆猪。出生的2头 子发育功能，是与哺乳动物性别决定直接相关的基 处死取睾丸组织。来自同品种有正常繁殖能力的同 因[1】。INSL3是胰岛素样激素超家族中一员，INSI_3蛋 白与其受体(LGR8)结合为INSL3一LGR8配体受体复龄公猪为对照N。除特别注明外，所有试剂均购自 合物，激活G蛋白，促进引带细胞分化，睾丸位置下 TaKaRa(大连)公司。 降。敲除INSL3基因或基因发生突变都会导致隐睾的1．2组织切片制备采集的睾丸样品，经固定一冲 洗一脱水一透明一包埋一切片一脱蜡一染色等步骤制作 收稿日期：2013—02—17：修回日期：2013—03-06 组织切片。制作好的切片在镜下观察拍照。 资助项目：国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08006-014 1．3 B、2008ZX08006—005)；上海市农业科学院青年基金(QJ2012—07)；上海 测 市农委成果转化项目(123919N0700、10391