《中国明对虾蜕皮抑制激素在大肠杆菌中的表达与分离纯化 Expression and purification of recombinant Fenneropenaeus chinensis molt-inhibiting hormone in E. coli》.pdfVIP

张继泉等：中国明对虾蜕皮抑制激素在大肠杆菌中的表达与分离纯化 中国明对虾蜕皮抑制激素在大肠杆菌中的表达与分离纯化① 张继泉②一“ 李富花” 王在照+ 吴长功。 相建海③+ (+中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室青岛266071) (“中国科学院研究生院 北京100309) 摘要 采用大肠杆菌表达系统对中国明对虾蜕皮抑制激素(MIH)进行了体外重组表达 研究。重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。尿素一SDS—PAGE分析表明，经1mmol／L 的WIG诱导4h后，重组蛋白获得了大量表达，在分子量为13kD处有一条与预测大小一 致的特异性蛋白条带；经金属螯合柱纯化后，得到了电泳纯的融合蛋白。Westem blotting 检测结果表明：重组表达的融合蛋白与兔抗刀额新对虾MIH的多克隆抗体特异结合，证 实该融合蛋白为中国明对虾MIH。通过胶内酶切与LC．ESI．MS分析进一步证实融合蛋白 的部分肽段与日本对虾MH-I一致。MIH融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在中 国明对虾蜕皮过程分子作用机制奠定了基础。 关键词 中国明对虾，蜕皮抑制激素，原核表达，融合蛋白 析，确定其成熟肽由75个氨基酸残基组成，包括6 0 引言 个非常保守的Cys残基，形成3个链内二硫键。 蜕皮抑制激素基因在甲壳动物的生长、发育和 眼柄是十足类甲壳动物神经内分泌的重要器 繁殖调控中起着重要作用，其重组蛋白的表达有助 官，其内分泌激素一直是甲壳动物生理学研究的热 于详细研究蜕皮抑制激素基因在甲壳动物中的调节 点之一Hj。眼柄视神经节x器官一窦腺复合体(x．机制。目前，有关甲壳动物蜕皮抑制激素重组表达 的研究已在刀额新对虾[7|、日本囊对虾[8|、斑节对 organ．sinusgland，XO—SG)是内分泌调控中心，类似于 哺乳动物的下丘脑．垂体系统，分泌甲壳动物高血糖 虾19J9、中华绒螯蟹110]等海洋生物中作过相关报道， 激素(crustacean hormone，CHH)、蜕皮抑但至今没有关于中国明对虾的报道。本文作者在获 hyperglycemic 得中国明对虾MIH全长cDNA及成熟肽编码区序列 hormone，MIH)、性腺发育抑制 制激素(molt—inhibiting hormone，GIH)和大颚器官抑制 激素(gonad．inhibiting 的基础上，利用pCR。r17／NrI’TOPO。TAExpression 原核表达系统对其进行了体外重组表达，成功地利 激素(mandibular hormone，MOIH)等多 organ．inhibiting TALONTMMetal 种神经肽类激素，参与调节甲壳动物的生殖、发育和 用BD Resins金属离子螯合柱 Affinity 蜕皮等重要生理过程【2,3J。在甲壳动物的蜕皮过程 分离纯化得到电泳纯的融合蛋白MIH，并利用west— 中，分泌到血淋巴中的MIH通过调节Y．器官蜕皮酮em 的合成间接控制蜕皮的发生Hj。 证，为进一步研究MIH在中国明对虾蜕皮生长中的