《535嵌合型腺病毒载体对脑胶质瘤的抑制作用》.pdfVIP

·317· 文章编号：1671—2897(2014)13—317—05 ·论著· 5／35嵌合型腺病毒载体对脑胶质瘤的抑制 作用 窦以河1 何裕超1t2’ 江水3 刘世海4 王衍刚5 隋爱华4 车树圣1 (青岛大学医学 院附属医院：1神经外科；4中心实验室，山东青岛266003；2宿迁市第一人民医院神经外科，江苏宿迁 223800；3即墨市人民医院神经外科，山东青岛266200；5焦作市人民医院神经外科，河南焦作 454002) 摘要 目的通过构建一种新型腺病毒载体，验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL基 因)治疗胶质瘤的疗效，并证实新型载体的优势。方法经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad／35 △E1．AE3，即E1和E3缺失的5型腺病毒纤维fiber被35型新型载体。利用基因重组，构建出重组 腺病毒质粒Ad5／35AEl．AE3．TRAIL。氯化铯密度梯度离心纯化Ad5／35AEl-AE3．TRAIL，并并测 定病毒滴度。采用逆转录酶．多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光技术、蛋白质印迹法(Westernblot)分 别检测目的基因的表达。结果 纯化后Ad5／35 AEl-AE3一TRAIL的病毒滴度为1．22×10”pfu／l。 blot等方法检测到目的 重组质粒经RT-PCR都扩增出104bp的基因片段。通过免疫荧光和Western 基因的高效表达。结论新型腺病毒载体质粒Ad5／35AEl-AE3-TRAIL能够高效的在脑胶质瘤细 胞中表达。 关键词靶向溶瘤腺病毒载体；重组腺病毒；脑胶质瘤 R739．41 中国图书资料分类号 文献标识码A Inhibitionof5／35chimericadenoviralvectoron gUoma DOU耽1，舾Yudmo啦，JL4NGSimi3，LIU蕊访∥，WANGy口删，SUlA妇0，CHEStmsl配n91 Medicd 1Det拼tmemofNeurosurgery；4＆mral匕蚰皤。可，‰锄酬Hospitalof@『驰oUnivers豇y College， Qi，础o266003；2DepartmentofNeurosurgery，FirstHospitalofSuqianOty，Suqian223800；3Department ofNeurosurgery，JimoPeoplesHospital，Qi,咨aao266200；’DepartmentofNeurosurgery，JiaozuoPeoples Hospital，Jiaozuo454002，China Abstract The oftumornecrosisfactor··related Objectiveefficiency apoptosis--inducingligand and anew ofadenovirusvectorthe ofthis (TRAIL type advantages gene)intreatinggliomabyconstructing newcarrierare Authorizedthe of of USA，AdS／ investigated．Methodsby laboratoryUniversityWashington witllE1andE3delet