Tyro3 RTKs调节精子发生的功能的研究.pdfVIP

北京协和医学院博}=研究生论文 中文摘要 哺乳动物精子发生是一个极其复杂的、且受到严格调控的细胞分化过程，可以分 为三个时期：有丝分裂期、减数分裂期和精子形成期。在这一过程中，精原细胞逐渐 转化成高度分化的单倍体精子，成熟的精子释放到曲细精管管腔。曲细精管中唯一的 体细胞一sertoli细胞，和发育中的各级生精细胞始终通过细胞间的直接接触和／或 旁分泌信号途径进行着物质和信息的交流，且Sertoli细胞的结构和功能随生精周期 发生着明显的周期性波动，但是，Sertoli细胞调节精子发生的分子基础仍不是很清楚。 基因敲除技术的出现，为这一领域的探究提供了新的工具。Tyr03受体酪氨酸激酶 tyrosine (Receptor RTKs三个基因同时敲除的雄性小鼠不育，但其机理未明。 以前已有研究证实Tyr03 RTKs在调节 鉴于此，我们利用Tyr03RTKs基因敲除小鼠为模型，深入研究了Tyr03 精子发生中的功能，研究结果为阐明Tyr03RTKs调节精子发生的机理提供了初步的 实验依据。 RTKs基因敲除小鼠的生育能力进行了观察。与正 我们对不同基因型雄性Tyr03 常雌性小鼠的交配实验表明：单基因敲除小鼠(A、M和T)生育能力与正常相仿： 双基因敲除小鼠生育能力因所敲除的基因不同而异，AT型敲除小鼠的生育能力正常， 但AM和MT型小鼠的生育能力均较正常明显下降。三基因敲除的杂合体小鼠生育能 力进一步下降，以aMT型与AMt型小鼠最为明显。三基因同时敲除的TAM型小鼠 完全丧失了生育能力。而且，各种基因型小鼠睾丸重量／体重比值和附睾精子计数的 结果显示与其生育能力吻合。生育能力低下的基因型小鼠睾丸重量／体重比值下降， 附睾精子数量减少，反之亦然。TAM型小鼠睾丸重量／体重比值降为正常的30％，附 RTKs亚家族的 睾内完全缺失成熟精子，出现大量未成熟精子。这些结果提示Tyr03 成员之间在调节精子发生上存在相互协调，Mer可能起到更重要的作用。 利用半薄切片技术，我们详细观察了TAM雄性小鼠生后发育阶段(3天、l周、 2周、3周、5周、8周和15周)睾丸的形态学变化，并对前3周睾丸内精原细胞、 初级精母细胞、精子细胞、支持细胞、肌样细胞和退化的细胞进行了计数。我们发现 北京协和医学院博上研究生论文 口M小鼠精原细胞、支持细胞和肌样细胞的数量没有改变。但自2周开始，睾丸出 现早期退化现象，初级精母细胞数量较正常下降，退化细胞增多，3周时改变更加明 显，而且圆形精子细胞数量也减少。这些退化现象随年龄增长而不断加剧。5周曲细 精管上皮中长形精子细胞数量明显减少，而退化细胞显著增多，Sertoli细胞胞质中出 现空泡；8周曲细精管中已少见长形精子细胞，且不同成熟阶段的精子细胞同时出现 于同一个曲细精管横切面上，提示精子发生的不同步；同时可见部分残余体脱落到管 腔中。15周小鼠已基本无长形精子；Sertoli细胞空泡化、精子细胞发育不同步、发 育各个阶段的生精细胞脱落及合胞体形成的现象更加明显；偶尔可见少量仅剩下 Sertoli细胞和精原细胞的曲细精管。应用流式细胞术对小鼠睾丸内细胞进行了核型分 析，与形态学观察的结果完全一致，TAM小鼠浓缩的单倍体核显著减少刚好对应了 长形精子的严重缺失。这些表型清楚地反映了Sertoli细胞和生精细胞之间的连接出 RTKs可能参与介导Sertoli细胞与生精细胞之间的黏附功能。这 现异常，提示Tyr03 的黏附能力显著下降。 本文对睾丸内脂滴进行了分析。脂滴是Sertoli细胞胞质中的一种重要的内含物， 其确切的功能和代谢情况目前仍不是很清楚。我们采用了冰冻切片油红O染色、结 Plus图像分析系统进行显微定量分析，详细观察了生后发育阶段到成年 合Image．Pro 后小鼠睾丸中脂滴的动态变化规律。结果发现，Sertoli细胞内脂滴的量随小鼠性成熟 而逐渐增加，与生精细胞的发育进展呈现正相关，生精细胞越多，脂滴的量就