芥菜籽对斑马鱼动脉粥样硬化的预防作用.pdfVIP

芥菜籽对斑马鱼动脉粥样硬化的预防作用 硕士研究生：何菲 指导教师：赵明教授 摘要 背景与目的： 特点是受累动脉病变从内膜开始[1-3]。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及 血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变 常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应 的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因 此称为动脉粥样硬化。[4]动脉粥样硬化是西方发达国家的主要死亡原因，随着 我国人民生活水平提高和饮食习惯改变，该病也成为我国主要死亡原因。动脉 粥样硬化始发儿童时期而持续进展，通常在中年或者中老年出现症状。由于动 脉粥样硬化斑块表现为脂质和坏死组织的骤聚，因此往往认为动脉粥样硬化是 退行性病变。现在认为，本病变是多因素共同作用的结果，[5，6]首先是病变 处中性粒细胞、血小板、巨噬细胞、及T淋巴细胞的聚集；其次是包括胶原、弹 性纤维及蛋白质多糖等结缔组织基质和平滑肌细胞的增生；第三是脂质，其中 主要含胆固醇结晶及游离胆固醇和结缔组织。粥样硬化斑块巾脂质及结缔组织 的含量决定斑块的稳定性以及是否易导致急性缺血事件发生。 LDL透过内皮细胞深入内皮细胞间隙，单核细胞迁入内膜，此即最早期。 Ox—LDL与巨噬细胞的清道夫受体结合而被摄取，形成巨噬源性泡沫细胞，对应 病理变化中的脂纹。动脉中膜的血管平滑肌细胞(SMC)迁入内膜，吞噬脂质形 摘要 成肌源性泡沫细胞，增生迁移形成纤维帽，对应病理变化中的纤维斑块。ox-LDL 使上述两种泡沫细胞坏死崩解，形成糜粥样坏死物，粥样斑块形成。从上述动 脉粥样硬化形成的机理可以得知：关键环节在于OX—LDL，如何防止LDL被氧化成 ox-LDL就成了治疗和防止动脉粥样硬化的核心[7—9]。 芥菜籽(mustardseed，MS)又名芥子，是十字花科芸苔属植物芥菜的种子， 含有芥子油、芥子黏液、多糖和B一谷甾醇等活性成分，其加工的产品芥末油和 芥末粉是我们生活中常用的调味品。近年来对芥菜籽提取物的研究发现，芥菜 籽不但是良好的天然抗氧化剂，而且具有独到的抗衰老功效[4]。而在东方的日 本，世界上人均寿命最长的国家，人们普遍有食用芥末的习惯。而中国传统医 学更认为白芥(芥菜籽的一种)具有防腐，消积化滞的功效[10一12]。因此明确 白芥是否具有抗氧化和防治动脉粥样硬化的作用，有利于我们开发中西方普遍 接受的保健食品和药品。 尽管利用小鼠模型在研究人类疾病中取得了显著的成果，但是由于小鼠自 身的生物学特性，使其在遗传学[13]，生物发育学和疾病模型的研究中的应用 有一定的局限性。[14]斑马鱼(Danio 基斯坦、缅甸及孟加拉国，因其体侧具有像斑马一样纵向的暗蓝与银色相间的 条纹而得名。斑马鱼繁殖能力强，每对成鱼每周可产300枚受精卵，能快速获得 大量胚胎，其胚胎透明，易于活体观察，生长发育快，受精24h后主要器官原基 基本形成，便于研究组织器官的发育和功能[15一17]。因此，斑马鱼成为理想的 研究脊椎动物发育的模式动物之一，在心血管疾病中血栓、动脉血管形成、炎 症、心肌病、心脏再生[18]和先天性心血管疾病等研究中大量应用· 材料与方法： I．斑马鱼：所有动物都是在南方医科大学伦理委员会的管理条例下处理的。转 U 硕士学位论文 科技大学温子龙教授馈赠，其他种类的斑马鱼来自南方医科大学细胞生物学 教研室中港联合实验室。AB鱼是野生型斑马鱼，做为所有实验的阴性对照； 转基盛斑马鱼，绿色荧光蛋白标记冠蛋白(coronin)，这是一种肌动蛋白 结合蛋白，与微管相互作用，标记巨噬细胞。 2．饲料：将普通饲料与不同含量的胆固醇溶解在乙醚中(主要是3％HCD)，充 lJ 分搅拌至乙醚挥发，60。C烤箱烘干，然后研磨至直径100m大小的颗粒， 分装。新鲜的芥菜籽，粗压榨，手工搅拌器搅拌研磨，加入高胆固醇饲料中 [19]，制备出不同芥菜籽含量的芥菜籽胆固醇倒料，主要是3％HCD+2．5％MS和 通过抑制肠道胆固醇