Isolation and characterization of antagonists against Rh....pptVIP

Isolation and characterization of antagonists against Rhizoctonia sp. 報告學生：楊麗燕、白瓊文 前言 * Rhizoctonia sp. （立枯絲核菌）屬於不完全菌綱，以菌核進行感染，是重要的植物病原菌。 * 在純培養下不形成有性與無性胞子，其營養菌絲具有下列特徵： 1. 菌絲的分枝在其起源處有縊縮； 2. 菌絲分枝在距分枝點處不遠有隔膜； 3. 菌絲常成直角或銳角分枝； 4. 菌絲無色至黃褐色，菌落最初為白色至乳白 色，最後呈黃褐色。 * 本菌可為害植株根、莖、葉，造成下位葉黃化，嚴重時，黃化現象向上蔓延，造成立枯病，也可在葉緣或葉鞘上造成不規則黃褐色 條斑等病徵。 * 本菌在水稻上會造成水稻紋枯病，在其他冬 季作物、田間雜草和其他植物上會造成種子 腐爛、根腐病和苗猝倒病，危害範圍相當廣泛，故其防治辦法也有許多研究報告。 * 前人研究 Bacillus spp.、Pseudomonas sepacia、Flavobacterium odoratum、Trichoderma spp.等都具有程度不一的防治效果。 目的 * 分離並初步鑑定具有能夠對 Rhizoctonia sp. （立枯絲核菌）產生拮抗作用的菌株。 材料 土樣 本組與第五組土樣，故宮路上、青青農場旁及明水路上的菜園。 無菌生理食鹽水 培養基 （1）1/10 TSA（＋cycloheximide 100 ppm） （2）1/10 TSA （3）MRB（+ streptomycin 30 ppm） （4）PDA （5）WA （6）WA（玻璃紙） （7）NA 生理及生化測試 ( 1 ) MacConkey agar ( 2 ) Simmons citrate agar slant ( 3 ) Trypticase nitrate broth ( 4 ) Gelatin ( 5 ) Phenol red glucose broth ( 6 ) Phenol red manniol broth ( 7 ) SIM agar ( 8 ) Starch agar 實驗架構 實驗方法 採樣 ↓ 篩菌 ↓ 分離 ↓ 純化 表一、菌株資料與拮抗實驗結果 表五、真菌菌株資料與對峙實驗結果 F-1 G (+) 桿菌，菌落為霧面白色不透明且扁平，會隨畫線方向生成紡綞狀，直徑約 0.5-0.8 cm，邊緣粗糙，產孢時菌體會膨大。 G-4 G (+)桿菌，菌落為霧面白色不透明且扁平，直徑0.3-0.5 cm，邊緣不規則，產孢。 G-5 G (+)桿菌，菌落為霧面白色不透明且扁平，直徑0.3 cm左右，邊緣不規則，產孢。 P-5 G (-)球桿菌，菌落為有光澤的乳白色，呈圓形突起，直徑0.1 cm ，具有黏性，不產孢。 F-3 絲狀真菌，起先為白色，成熟後菌落中間呈墨綠色，鏡檢後有帚狀的分生孢子柄。 TF-2 Trichoderma sp. ，產孢後菌落顏色偏黃綠色，分生孢子柄為短瓶狀，孢子是圓形。 TG-1 Trichoderma sp. ，產孢後顏色偏綠色，分生孢子柄為瓶狀，孢子為略尖的圓形。 表三、具拮抗能力菌株之生化測試 結果 1. 拮抗實驗所得到的有明顯效果者，在五十三株不同類型的測試菌中共有 10 株，其中Trichoderma spp.有兩株，放線菌有三株，其他種類細菌有四株，還有一株 Penicillium sp.。 2. 經生理生化測試後得知 F-1、G-4、G-5屬於 Bacillus spp.，而剩下一株 P-5 經推論認定屬於 Flavorbacterium sp.。 3. B. subtilus 作為 Gram’s stain 的正對照，經試驗後亦發現有拮抗 R. solani 的能力。 4. 三株 Bacillus spp. 經過進一步的測試後，判斷 F-1、G-4、G-5分別為 B. pantotenticus、B. licheniformis 以及 B. brevis。 5. Trichoderma spp.八株中僅 TF-2 及 TG-1 有菌絲纏繞現象 6.