基因工程超强完整整理.docVIP

绪论 1972，美国斯坦福大学的Paul Berg及其同事完成第一个重组DNA分子的构建。 1973，Cohen Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化，标志基因工程诞生。 基因工程的成就和应用 成就：（1）一系列新的基因工程操作技术的出现； （2）各种克隆、表达载体的成功构建； （3）一系列转基因菌株、植物、动物的出现。 应用：（1）解决环境污染、能源短缺等全球问题； （2）农业生产中的应用：可以培养出高产，优质，抗逆的农作物，解决全人类共同面临的粮食短缺问题。利用植物生产特殊蛋白质（多肽类药物）。 （3）转基因动物。 分子克隆工具酶 抑制星号活性的措施： ① 减少酶的用量，以减少甘油浓度 ② 保证反应体系不含有机溶剂 ③ 适当提高离子强度 ④ 降低pH至7.0 ⑤ 使用Mg++ 甲基化酶：作为限制与修复系统的一员，用于保护宿主DNA不被相应的限制酶切割。 依赖于甲基化的限制系统：E. coli中至少有3种依赖于甲基化的限制系统：McrA , McrBC , Mrr. mcrA基因表达E. coli防御体系中起重要作用的McrA酶，该酶能特异性地作用于外来DNA上的被甲基化的胞嘧啶序列，即C5mCGG特异序列，使之分解，对大肠杆菌本身起保护作用。 mcrA基因的变异，导致上述功能缺失，对外来DNA中被甲基化的胞嘧啶特异序列（C5mCGG）失去作用，有利于克隆体的稳