苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及其糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性的研究.ppt

苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究  研究背景 Evolution of Drug Resistance in S. aureus 苯唑西林耐药的金黄色葡萄球（MRSA）是引起医院感染的主要病因，常发生于免疫力低下的住院患者。 世界首例MRSA ：1961年，英国 目前在许多国家仍在增长： 世界约100,000人/年感染MRSA  国疾病控制和预防中心（CDC）统计 1989-2001年美国ICU病房MRSA发病率 2001-2003年协和医院MRSA发生率比较 ?内酰胺类抗生素对金黄色葡萄球菌的作用机制 青霉素结合蛋白（PBP）是参与细胞壁肽聚糖成分合成的酶。?-内酰胺类抗生素能与细菌胞膜的PBP结合使其失活，从而细胞壁合成受到抑制，导致细菌死亡 对?内酰胺类抗生素（如苯唑西林）耐药机制： 低水平耐药：产生过量的?内酰胺酶、PBPs过量表达、PBP与苯唑西林亲和力下降； 高水平耐药：产生由mecA基因编码的PBP2a，可替代其它PBP合成细胞壁，但与?内酰胺类抗生素亲和力差，而产生耐药。 对其它抗生素耐药机制： mecA基因位于一个可移动元件SCCmecDNA，该元件由不同的整合子、转座子等组成，分别编码不同抗生素的耐药基因。 MRSA治疗上的困难 多重耐药 有效治疗药物：万古霉素、替考拉宁、利萘唑烷、链阳霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、氯霉素等 已出现对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌：多为MRSA 在住院患者间易传播，造成爆发流行 MRSA耐药性及流行病学研究对于正确治疗其引起的感染、防止其播散有重要意义。 技术路线 从协和医院2002年住院患者分离212株MRSA（表型测定） MRSA的确证（苯唑西林－盐琼脂筛选法 mecA-femB 双重PCR法) ICU、RCU病房的MRSA 耐药性检测 回顾性分子流行病学调查 （琼脂稀释法；抗生素纸片琼脂扩散法） （脉冲场凝胶电泳） 替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性 第一部分：MRSA的筛选及耐药性检测 一、MRSA的表型鉴定 待测菌株 革兰氏染色 触酶试验（＋） （阳性且呈双、链、葡萄状球菌） 胶乳凝集试验（测凝集因子、蛋白A）（＋） 疑难菌：API系统和VITEK系统鉴定 苯唑西林药敏试验 （抑菌圈直径≤ 10mm） 二、MRSA的确证试验 苯唑西林－盐琼脂筛选试验检测MRSA 方法： （参照NCCLS M100-S13文件中的规定） 待测新鲜菌悬液（0.5号比浊管浊度） 点种于苯唑西林－盐琼脂筛选平皿 （含4% NaCl、6μg/ml 苯唑西林的M-H平皿 ） 空气，35℃孵育24-48小时 生长菌落数≥1 检测结果：212株中有165株金葡菌在筛选平皿生长 mecA～femB 双重PCR法检测MRSA（原理及方法） mecA：编码PBP2a，苯唑西林耐药的决定子。 femB：某些葡萄球菌属染色体辅助基因，编码细胞壁合成所需的一种重要酶。 mecA～femB 双重PCR法检测MRSA（原理及方法）