中文HbAc检测方法比较以及检测标准化最新进展(简化).ppt

HbA1c检测标准化以及检测方法比较 绍兴市人民医院 张丽红 主题 一.糖化血紅蛋白检测的标准化和应用 二.糖化血紅蛋白的检测方法 三.A1c检测疑难解答 一.糖化血紅蛋白的标准化和应用 HbA1c ：糖尿病疗效的重要监测指标 HbA1c 结果反映2-3个月前的平均血糖浓度 良好的可重复性（以CV%为标准 ），即同一个病人的HbA1c 结果具有长期的可比性，是衡量检测方法好坏的重要标准。 DCCT 和 UKPDS的结果公布后, HbA1c作为评估晚期糖尿病并发症的发生率高低的一个重要指标被临床广泛应用 。 HbA1c检测准则: 准确性 （由标准化来解决差异） 重复性 检测批内与批间CV 目前定下最小CV为2% ， 是否降至2% 仍讨论之中 实验室与原产厂家总误差必须＜2% 主要方法 离子交换层析(bio-rex 70,参考方法) 免疫法 亲和层析 糖化血红蛋白 IFCC – 工作组 HbA1c定义 血红蛋白?-链的一个或两个N端V被糖化 一级参考物 纯HbA1c 和纯HbA0 混合物 一级参考方法 质谱法 毛细管电泳法 A1c 检测方法标准化的一致意见 A1c检测应该世界范围内标准化,包括参考系统 IFCC 参考系统是标准 A1c 结果报告: IFCC 单位 (mmol/mol) NGSP 单位 (DCCT %) 如果研究满足了要求: A1C衍生的平均葡萄糖浓度 二.HbA1c检测方法 糖化血红蛋白的不同检测方法及公认的金标准方法 目前HPLC法测定HbA1c使其准确性和重复性得到很大的提高。美国临床化学协会（AACC）糖化血红蛋白标准化分会和IFCC HbA1C标准化工作组建议，以DCCT研究中所“指定的方法”- HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准，希望以此使大多数的实验方法能够参照“指定的方法”实现标准化 -----Bio-rad HPLC 几种主要的检测糖化血红蛋白的方法 测定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化学性质的不同而进行的，目前主要的检测方法有5种： (1)离子交换高效液相色谱分析法- 检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准 基于Hb B链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。在中性pH条件下,HbA1c携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将其与其它组分(HbA1c,HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0)区分开,得到分离。此方法曾应用于美国DCCT的研究，是目前检测HbA1c的金标准 (2)微柱法 微柱内的阳离子交换树脂（如Biorex 70）在PH近7时解离后带阴电荷，而Hb解离后带阳电荷，二者可形成离子键。由于GHb的阳电荷比HbA少，与树脂的结合力相对低，容易被洗脱。用分光光度计分别测定洗脱液中GHb和溶血物中总Hb的吸光率（A），可计算出GHb占总Hb的百分比（%）。但此方法的影响因素比较多： 1. 洗脱温度对结果有较大影响 ??? 2. 抗凝剂肝素能使测定结果增高 3. 某些血红蛋白如HbF异常增加时，也会与糖化血红蛋白同时洗脱，从而使结果产生偏差 (3) 电泳法 胶体颗粒在一定条件下可以带有电荷，带有电荷的胶体颗粒可以借静电吸引力在电场中泳行，带正电荷者泳向负极，带负电荷者泳向正极，此种现象称为电泳。血清中各种蛋白质都有它特有的等电点，各种蛋白质在各自的等电点时呈中性状态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。但此方法学的弱点是： 1. 需成批进行样本分析，速度比较慢，无法进行实时检测 2. 自动化程度低，急诊插入、自动维护等功能比较欠缺 （4）亲和层析法 利用生物高分子能与相应的专一配基分子可逆结合的原理将配基通过共价键牢固地结合于固相载体上制得亲和吸附系统。带有杂质的高分子分离目的物在一定条件下，能以某种次级键与已固相化的配基结合，而杂质则不吸附，除去杂质后变换条件，又可以使待分离的高分子物质重新解离，获得纯化(硼酸亲和层析，与Cis-diol基团结合) 所分离的产物不仅包括β链氨基酸末端的糖化成分，也包括α链氨基酸末端和所有血红蛋白分子ε残基的糖化成分，其最终结果应为总糖化血红蛋白 检测总糖化血红蛋白，即只能区分糖化与非糖化的成分) Primus PDQ/Ultra2 (5) 免疫法 使用单克隆或多克隆抗体直接测定血红蛋白β-链上糖基化的N末端的4-8个氨基酸，因此对HbA1C上的糖基特异性好 但是许多同源的糖化血红蛋白变体也有相同的N末端结构，从而会对结果造成干扰。在定标方面，需与HPLC作相关校正 综合现在临床实验室中常用的GHb测定方法，因为原理的不同，测定的结果准确度、重复性都有所差异。相信随着对HbA1c实验方法标准化的重视和提高，HbA1c项目的检测在