仪器分析荧光光度法课件.ppt

第五章分子发光分析法 5. 分子发光分析法 荧光 磷光 化学发光 生物发光 电化学发光 散射光 根据激发所用能量 E来源不同,分子发光有： 5.1 分子荧光和磷光分析 5.1.1 原理 5.1.2 荧光（磷光）光谱仪 5.1.3 分子荧光分析法及其应用 5.1.4 荧光分析新技术简介 5.1.5 室温磷光法（自学） 本次课内容 荧光和磷光的产生 激发光谱和发射光谱 荧光与物质分子结构的关系 影响荧光强度的因素 1.概述 荧光光谱的范围可以从X光到红外光谱区。 分子荧光分析法 1.概述 某些物质受紫外光照射后能发射比吸收的紫外光波长更长的紫外光荧光或可见荧光。 1.概 述 分子结构：分子中含有共轭双键体系，具 有吸收辐射能，产生电子能级 跃迁的性质。 环境条件：适当的辐射能照射，合适的温 度、溶剂、酸碱度等。 5.1 分子荧光和磷光分析 5.1 分子荧光和磷光分析 激发态 第一激发态最低振动能级 基 态 分子的激发态 分子的激发态 图示： 分子的激发态 分子的激发态 分子的激发态 去活过程及荧光的产生 激发态较高能层 激发态较高能层 激发态最低能层 基态各能层 去活化过程 处于激发态各不同振动能层的分子 无辐射跃迁  去活化过程 激发态最低振动能层 2. 激发光谱和发射光谱（特征光谱） 激发光谱：将激发光的光源用单色器分光，测定不同波长照射下物质所发射的荧光强度（F），以F做纵坐标，激发光波长λ做横坐标作图。 激发光谱反映了激发光波长与荧光强度之间的关系。 2. 激发光谱和发射光谱 发射光谱：固定激发光波长，让物质发射的荧 光通过单色器，测定不同波长的荧光强度，以 荧光强度F做纵坐标，荧光波长λ做横坐标作图。 发射光谱反映了在所发射的荧光中各种波长组分 的相对强度。 荧光（发射）光谱的特征 （1）stokes位移 荧光发射波长总是大于激发光波长的现象。 （2）荧光光谱的形状与激发光波长无关，不同波长激发光只对荧光强度有影响。 关于激发光的波长的问题 1.能够使荧光物质产生吸收并发射出荧光的激发光的波长并不具有唯一性； 2.在保证激发的前提下，不同激发波长处的荧光发射光谱形状相同，但荧光强度不同。 荧光（发射）光谱的特性 （3）镜像规则 荧光光谱与激发光谱呈镜像对称。（注意更正P91图5.3标注！） 3. 荧光和分子结构的关系 发射荧光的物质应同时具备以下两个条件： 物质分子必须具有强的紫外-可见吸收； 物质分子必须有较大的荧光量子产率。 3. 荧光和分子结构的关系 3. 荧光和物质分子结构的关系 （1）跃迁类型 π* π 较π* n跃迁的荧光效率高。 3. 荧光和分子结构的关系 （3）刚性平面：分子的刚性越强及共平面性越好，荧光量子产率就越高。 3. 荧光和分子结构的关系 （4）取代基效应：在芳香化合物的芳香环上，进行不同基团的取代，对该化合物的荧光强度和荧光光谱都会产生影响。 增强荧光的取代基：-OH、-OCH3、-NH2、 -CN、 -NR2等给电子基团（增加π电子共轭程度）； 减弱荧光的取代基：-COOH 、-NO2 、-F 、 -Cl