毛细管电泳.ppttmp.pptVIP

毛细管电泳 capillary electrophoresis，CE 一.概述 传统的电泳技术由于受到焦耳热的限制，只能 在低电场强度下进行电泳操作，分离时间长，效 率低.80年代初,细径毛细管被用于电泳，由此产 生了一种新型的分析技术——毛细管电泳。 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳 (HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分 离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中 各组分之间淌度和分配行为上的差异而实 现分离的液相分离分析技术。由于毛细管 内径小，表面积和体积的比值大,易于散 热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产 生,这是CE和传统电泳技术的根本区别。 毛细管电泳的兴起与发展 1 . 1988—1989年 出现第一批CE商品仪器 2 . 1998年—广泛应用于药物分离、脱氧 核糖核酸(DNA) 测定 CE开始主要用于蛋白质，多肽的分析,以后逐渐被广泛应用于生物，化学，医药，环保等领域。它具有分离效率高，分析速度快，样品及试剂用量少,洁净无污染等特点,和HPLC(高效液相色谱法)成为分析化学中互补的技术。随着生命科学的发展，毛细管电泳技术也有了广阔的发展空间.目前，不同分离模式的毛细管电泳技术正成为最重要的生物样品分离分析手段。 二、 毛细管电泳基本原理 CE 是以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道，依据组分间淌度和分配差异，实现分离的技术 。 二.毛细管电泳基本原理 电泳速度（Ue cm/s） 在单位时间内，带电粒子在毛细管中 定向移动的距离； 进样系统 静压力进样和电动进样 进样体积一般在纳升级 进样长度必须控制在毛细管总长度的1%~2%，否则将影响分离效率 分离系统 毛细管:由熔融石英制成,内径通常为25~75 μm,外径为350~400μm,有效长度为80~100cm; 恒温系统:控制柱温变化在±0.10C； 高压电源:电流0~300μA电压0~30KV,电压稳定性在±0.1%; 检测系统 常用的检测方式是紫外-可见光吸收.检测器位于距样品盘约毛细管总长的2/3~4/5处,对毛细管壁内部分进行光聚焦； 此外，荧光，激光诱导荧光，质谱等检测方法也被应用于毛细管电泳; 高效毛细管电泳仪实图 3.毛细管电泳基本分离原理 可见，在毛细管长度一定，某时刻电压 相同的条件下，迁移时间决定于电泳速度Ue 和电渗流速度Ueo,而两者均随组分的不同荷 质比而异;所以,基于荷质比的差异就可以实现 组分的分离。 电泳仪工作示意图 三.毛细管电泳的分离模式 MECC技术的最大的特点是使毛细血管 电泳有可能在用于离子型化合物分离的同时 进行中性物质的分离，因此在各个领域显示 了广泛的应用前景。 是一种较早采用的模式。选用淌度比样品中任何待测组分的淌度都高的电解质作为先导电解质，用淌度比样品中任何待测组分的淌度都低的电解质作为尾随电解质，夹在先导电解质和尾随电解质之间的样品组分根据各自的有效淌度不同而分离，达到平衡时，各组分区带上电场强度的自调节作用使各组分区带具有相同的迁移速率，故而得名。 毛细管区带电泳 四.CE技术的应用 毛细管电泳技术可检测多种样品，如血清、血浆、尿样、脑脊液、红细胞、体液或组织及其实验动物活体实验；且可分离分析多种组分，如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析，以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等 CE和HGP 目前，人类基因测序已基本完成，人类基因组计划进入后基因组时代。但是，耗资巨大的HGP至少在现阶段并没有产生原先设想的强大影响力。这是因为人类基因组图谱并没有告诉我们所有基因的“身份”以及它们所编码的蛋白质。人体内真正发挥作用的是蛋白质，蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色，其中可能藏着开发疾病诊断方法和新药的“钥匙”。“后基因时代”，一个以“蛋白质组”为重点的生命科学的新时代到来，需要对蛋白质更多的研究，毛细管电泳技术将发挥更大的作用。 参考文献 《仪器分析》,吴谋成主编,北京:科学出版社，2003 《现代生物样品分离分析方法》,张玉奎等编,北京:科学出版社,2003 《蛋白质化学与蛋白质组学》,夏其昌等编著,北京:科学出版社,2004 毛细管电泳技术发展及应用前景,王雅杰,张银等 毛细管电泳原理及在药学领域的应用,卞红平 二维电泳（two-dimensional electrophorese） 及其在蛋白质组学中