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Separation Modes of capillary electrophoresis 毛细管电泳的分离模式 CITP- Capillary isotachophoresis 等速电泳 CZE- Capillary zone electrophoresis 区带电泳 CIEF- Capillary isoelectric focusing 等电聚焦 CGE- Capillary gel electrophoresis 凝胶电泳 CEC- Capillary Electro-Chromatography 电色谱 Micelle electrokinetic capillary chromatography, 胶束电动色谱 Micro emulsion electrokinetic chromatography 微乳液电动色谱 Packed capillary electrokinetic chromatography 填充电动色谱 ?-FFE- Microchip free flow electrophoresis 芯片自由流电泳 毛细管等速电泳（CITP）毛细管区带电泳（CZE） K+ and Na+ separation CITP，毛细管等速电泳 选择前导（LE）和终末电解质（TB） 加电压后离子按照淌度大小次序顺次排列 平衡后，各个区带的运动速度相等 定性信息由电导检测到的台阶高度决定 定量信息由区带的长度决定 区带浓度由前导电解质浓度决定 Kohlauch公式－分离带之间的浓度关系（以阳离子的分离为例） CZE 对缓冲溶液的基本要求 适当的pH 缓冲容量 背景吸收 （UV检测器的要求） 淌度低（焦耳热问题） Low pH CE CZE 手性分离 低pH 条件下的带正电荷的手性异构体的分离 高pH条件下的带负电荷的手性异构体的分离 End of part 5 不适合用CZE分离的组分 电中性组分 DNA 电核与分子量之比相近. 对5端无磷酸的小分子也可以进行分析。 蛋白质-SDS络合物 原有电核特征被屏蔽, 主要取决于络合的SDS, 从而使电核与分子量之比相近。 低聚核苷酸分子大小与迁移率的关系(5-端无磷酸) 肽电荷, 分子大小与迁移率的关系 FZE-free zone electrophoresis 区带之间的淌度和浓度有确定的关系-限制性。 各个区带的淌度与浓度之间有限定关系，平衡后运动速度相同。 What if 为何中性组分和负电组分出峰？ 电导响应和微分谱图。 6, 7, 8 units * * 毛细管电泳的六种分离模式 K+ Na+ CZE CITP K+ Na+ LB TB V-电压 I-电流 R-电阻 S-电导 A-截面积 L-长度 E-电场强度 R K+ Na+ LB TB E 电场 K+ Na+ LB TB T 温度 K+ Na+ LB TB 电阻 K+ Na+ LB TB K+ Na+ LB TB ?+ S 淌度 电导 K+, Na+ Sample mixture Terminating buffer Leading buffer Na+ + - Closely connected solute band Terminating buffer Leading buffer K+ CITP UV K+, Na+ sample Running buffer Running buffer Na+ + - Solute zones Running buffer Running buffer K+ CZE,毛细管区带电泳 K＋ Na＋ CE中常用的添加剂及作用 糖和萘酚的分离 硼酸盐 络合剂 凝胶中dsDNA增溶；溶解蛋白质；CEC选择性 尿素 氢键型可溶性试剂 CEC和凝胶电泳中改变选择性 K＋，Na＋，Cu2＋ 金属离子 手性分离；改善疏水性溶质溶解 环糊精；冠醚；胆汁盐 手性添加剂 改变EOF；改变MECC选择性 甲醇；乙腈；三氟乙酰酐TFA 有机添加剂 EOF降低；低浓度时抑制吸附；高浓度下用作筛分介质 甲基纤维素，聚丙稀酰胺，聚乙二醇PEG，聚乙烯醇PVC 线性亲水聚合物 增加离子强度而不增加电导；影响对蛋白质的选择性 三羟基甲基氨基甲烷Tris 2－吗啉乙烷磺酸 MES 2－吗啉丙烷磺酸 MODS 两性物质 EOF改变；溶解疏水溶质；离子对试剂；CMC以上形成固定相 十二烷基硫酸钠 SDS 十六烷基三甲基季胺溴CTAB 聚氧乙烯山梨糖醇酐Tween 表面活性剂 作用 实例 类型 High pH operation Low pH operation 七个氨基酸的小肽，分子量相近，但是等电点不同，因此在不同pH条件下带电情况不同 pH 2.5 pH 4.0 pH 11