酶工程(酶制剂制备2).pptVIP

二、酶蛋白的提纯与精制3 酶蛋白纯度检测 酶蛋白经分离纯化后的纯度如何，必须用适当的实验方法进行鉴定，最常用的方法是‘聚丙烯酰胺凝胶电泳’（Polyacrylamide Gel Electrophoresis PAGE）, 现已发展成很多方法，如：PAGE圆盘电泳（柱状电泳）、PAGE垂直板状电泳等。 二、酶蛋白的提纯与精制3 酶蛋白纯度检测 ⑴ 电泳的基本原理 聚丙烯酰胺凝是由丙烯酰胺单体（Acr)和N，N-亚甲基-双丙烯酰胺(Bis)在催化剂的作用下，经聚合反应而形成的，根据欲分离的蛋白分子的大小，通过控制Acr和Bis的比例以及总浓度来控制凝胶的孔径大小，制成各种孔径的凝胶，这样蛋白质颗粒在电泳时，两种作用力，即电场力和蛋白质颗粒在电场中运动所受的阻力， F= H .Q……………（1） F/ =6π．γην（2） F:电场力； H：电场强度；Q：质点所带电荷； F/ ：：质点所受阻力；γ：质点半径；η：电解质黏度；ν电泳述度； 三、 酶制剂的成型与保存1 酶制剂的主要剂型及其制备 ⑴ 酶制剂的主要剂型： 粗酶制剂：实际包括两类制剂，液体酶制剂和固体粗酶制剂。 纯酶制剂：经过纯化后的制剂，通常是结晶酶制剂，有时也制成液体制剂，如遗传工程的工具酶，常加甘油成剂；医用酶有液体口服剂、针剂(安瓶)、片剂、酶药剂、固定化微囊等商品；分析试剂用酶，则常为结晶酶； 工业用酶多为粉剂、颗粒酶、麸皮酶等粗制酶；液体酶制剂，较不稳定，但较经济，常为某些工业用户就近使用而生产。 三、 酶制剂的成型与保存1 酶制剂的主要剂型及其制备 ⑵ 酶制剂的成型： ① 固体粗酶制剂：固体粗酶制剂的干燥成型酶液经浓缩、沉淀或吸附后，再经干燥处理并添加填充剂、稳定剂调配即成成品干剂。 在干燥作业中，常添加一些添加剂，以防止酶粉飞扬，而制成颗粒酶，或增加酶的热稳定性和保藏稳定性。 三、 酶制剂的成型与保存2 酶制剂的保存 产品保存 大多数酶在干燥固体状态下比较稳定，液体酶就不如固体酶稳定。在潮湿和高温情况下更容易丧失活性，污染杂菌，即使是喷雾酶粉，如果包装材料不合适，在保存期间也能吸潮、结块，甚至失活。尤其是雨季威胁更大。新鲜麸皮酶，只有经气流干燥后的产品，才能在干燥和室温下存放(3—5个月)，各种酶制剂保存都以低温，干燥为宜。 酶制剂包装材料，多采用高分子聚合物，聚乙烯塑料薄膜双层膜袋，封装后，对延长保存期，防止结块和失活有良好效果。 * * 在一定的电场中，蛋白质分子的理论电泳迁移述率（即迁移述度） V=Q/6π．γ.η（3） 从这个公式中可以看出，V与蛋白质所带电荷的多少成正比，而与蛋白质分子的大小成反比。 不同的蛋白质，其分子量和所带电荷的多少都表现出不同程度的差异，从而在电泳时有不同的迁移输率，经电泳后，不同的蛋白分子迁移到电泳介质的不同部位，经过蛋白质染色处理，在凝胶的不同区域表现出相应的电泳带。 从这个原理来讲，电泳技术不仅能对蛋白质进行纯度鉴定，并且还是分离提纯的有效方法。 ⑵ 基本操作要点 ① 聚丙烯酰胺凝胶浓度确定 凝胶的孔径由丙烯酰胺单体（Acr）和双体（Bis）的总浓度（T%）和双体占总浓度的百分比（C%）所决定。 T%＝ （a＋b）/m×100% C%＝b/（a＋b） ×100% a：单体；b：双体；m: 凝胶溶液体积 T％： 凝胶总浓度，主要考虑要分离的蛋白质分子量的大小而定；C％ 决定凝胶的交联度的高低；在T％确定后；调整C%，可改变凝胶孔径的大小。 经验公式是：C＝6.5－0.3T 还有些学者主张固定为 C＝5％T 聚丙烯酰胺凝胶浓度参考表 样品 分子量范围 适宜的T% 蛋白质 104 20-30 104 －4× 104 15-20 4× 104 － 105 10-15 105 －5× 105 5-10 5× 10