中山大学课件质粒提取技巧及常见问题分析.pptVIP

分子生物学与生物化学实验操作、设计与技能-质粒提取技巧及常见问题分析 开课老师：李刚 　　　　　 质粒提取技巧及常见问题分析 碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是许多人却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。本次课将告诉大家常见的几种质粒提取的方法、原理、步骤及其技巧，并对质粒提取过程中遇到的常见问题进行分析。 分子生物学实验所需基本工具 高效菌株（E.Coli）：DH10B，Top10, DH5?,XL-1 blue,HB101等。 各种基因（载体，质粒） 超纯水（三蒸水） 高效酶类（限制酶，连接酶，Taq酶，pfu等） 分析纯（或化学纯）生化试剂。 经典的分子生物学工具书：分子克隆（目前出到第三版），精编分子生物学实验指南（目前出到第四版）等。 各种仪器设备：离心机、培养箱、PCR仪、灭菌锅等； 基因（质粒）的获取 1、从其它实验室获得；（首选） 2、从商业公司购买；（次选） 3、自己克隆；（末选） （1）RT-PCR 克隆；（有原始材料） （2）合成全长基因；（无原始材料） （3）合成片段、拼接； （无原始材料） 什么是质粒？ 质粒是独立于染色体外的DNA分子，其大小范围在１KB至２００KB以上不等。大多数来自细菌细胞的质粒是双链、