2012(2009级中药学本科)中药药理(中药基础理论地研究思路和方法(补充)).ppt

中药基础理论研究思路与方法 三.要紧密结合临床？ 中药基础理论研究的主要内容 一.中药本身的药性理论 二.中药相互作用理论 三.中药对病原病因作用理论 四.中药对机体作用理论 中药理论研究思路与方法 一.文献研究 包括古代文献和现代文献 归纳前人的经验、认识和理论； 分析对比，去粗取精、去伪存真； 理解这些理论的科学意义和实用价值； 有所发现、有所创新 二.实验研究 实验研究几乎涉及现代医药学所有的学科及一些自然科学、人文科学的内容。 中药理论中的许多内容对现代科学来说也是涉及未深，应将其作为未知事物，通过实验来认识， 而不是简单地用现代的某些知识去解释它、衡量它。 三.临床研究 中药理论源于临床实践，因而中药理论的现代研究亦不应脱离临床实践。 许多情况下，中药理论只有通过临床研究才能取行切合实际的结论。 临床研究主要任务是：对传统理论进行验证和发挥，通过现代临床验证、分析进而发展中药理论。 5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响 目前，有体外实验表明，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR通过去甲基化作用可使多种含有CpG岛的高甲基化抑癌基因重新表达，从而恢复抑癌功能[9]。本实验RT-PCR结果显示，TFPI-2在Eca9706细胞中无表达，经过不同浓度的5-Aza-CdR处理Eca9706细胞后，TFPI-2亦重新出现表达，且在一定范围内随药物诱导浓度的增大表达逐渐增强。MIZUNO等[10]研究表明，肿瘤细胞中DNMT的表达较正常的高4～12倍，也证实DNMT上调参与肿瘤发生。这与我们的实验结果一致。根据MTT实验可知，经过5-Aza-CdR干预处理过的Eca9706细胞增殖明显受抑制，且随着药物浓度的增加，抑制作用越明显。从本实验结果分析，DNA启动子区去甲基化能较明显地抑制食管癌细胞增殖，并与其诱导剂量呈正相关，推测这种抑制作用与去甲基化后重新激活TFPI-2基因的转录和表达有着直接关系;此外可能与去甲基化后诱导细胞凋亡有关。进而通过流式细胞仪分析，结果显示，经不同浓度5-Aza-CdR干预的Eca9706的细胞中，用药组与对照组相比细胞凋亡率凋亡率有所增加，并且与5-Aza-CdR诱导剂量有依赖性关系。BENDER等[11]在同等条件下用5-Aza-CdR处理恶性肿瘤细胞系和正常纤维细胞系时，发现肿瘤细胞增殖均被抑制，而纤维细胞增殖不被抑制。因此，5-Aza-CdR对Eca9706细胞增殖的抑制及凋亡的增加不是药物的毒性影响，可能是因为使TFPI-2重新表达的结果。 目前，国外以TFPI-2为药物研究靶点，就TFPI-2在肿瘤治疗、肿瘤临床诊断、促进伤口愈合和动脉粥样硬化治疗等领域中的应用，也正在进行广泛深入的研究。本研究用甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理人食管癌Eca9706细胞株，检测TFPI-2基因表达的变化及其对细胞增殖和凋亡的影响，以期寻找治疗肿瘤的新靶点。 【参考文献】 [1]HUBE F， REBERDIAU P， IOCHMANN S， et al. Characterization and functional analysis of TFPI-2 gene promoter in a human choriocarcinoma cell line [J]. Thromb Res， 203， 109(4)：207-215. [2]MIYAGIi Y， KOSHIKAWA N， YASUMITSU H， et al. cDNA cloning and mRNA expression of a serine protein 5 and tissue factor pathway inhibitor-2 [J]. J Biochem， 1994， 116(5)：939-942. [3]RAO CN， SEGAWA T， NAVARI JR， et al. Methylation of TFPI-2 gene is not the sole cause of its silencing [J]. Int J Oncol， 2003， 22(4)：843-848. [4]KONDURI SD， SRIVENUGOPAL KS， YANAMANDRA N， et al. Promoter methyl and silencing of the tissue factor pathway inhibitor-2(TFPI-2)， a gene encoding an inhibitor of matrix metalloproteinases in human glioma