多糖的研究方法及其现状.ppt

最近 作用机理研究 -------进展快 机体 免疫细胞 多糖 ----分子水平 -------激活 --------释放出细胞间传导的信息Cytokine -------再作用于免疫细胞 ---------体内协同作用 最终 抑制肿瘤生长 多糖在机体免疫反应中相当于抗原 ----免疫细胞可识别多糖 ---迅速被多糖诱导激活产生免疫反应 多糖作用机理研究集中于: 1.多糖与免疫细胞是否有分子水平接触? 2.怎样接触? 免疫细胞表面是否存在识别 多糖的受体? 3.免疫细胞激活后如何协同作用杀死癌细胞? 研究至今 有的已阐明 如: 发现 β-Glucan与免疫细胞(单细胞,巨噬细胞, 中性粒细胞,自然杀伤细胞)---发生特异性结合---活 化信号传导途径---调节细胞因子释放 1997发现人体单细胞表面的受体 多糖对机体作用后 细胞因子(TNF-α, IL-1,2)浓度 显著↑ 正在深入研究中: ?-D-(1→3)-Glucan ----抗肿瘤 水溶 水不溶 不同立体结构(单螺旋 三螺旋 无规线团 半柔顺链 聚集体) 不同构象-----不同活性 ----由于细胞表面受体蛋白具特定构象---只识别特殊构象多糖 杂多糖 糖蛋白 α-D-(1→3)-Glucan -------显著抗肿瘤 阐明 多糖---靶细胞上受体 -------分子水平药物设计 -------重要指导意义 多糖 分子内及分子间 较强氢键作用 -------不溶于水 ---影响活性 大量实验表明 衍生化 ----水溶性提高----活性提高 ——近代研究另一热点 多糖衍生化两种方法 1.不溶性多糖 水解 醇解 酶解 如 碱不溶性多糖 (β-Glucan 与甲壳素复合物)---甲壳素酶解去甲壳素---水溶 甲酸解 多糖---99%HCOOH降解---99%EtOH沉淀---溶解,透析---冻干---formalated derivatives Smith降解 pH3-5水溶液—0.1M NaIO4 氧化---NaBH4 还原---部分酸水解---Polyalcohols 2. 半合成方法 衍生化基团取代 ---多糖中羟基中H 原 子---改变氢键作用---成盐—改善溶解性 羧甲基化 硫酸化 磷酸化 羧甲基化 (1) 多糖(0.15M NaOH, 95oC, 2h)—残渣水洗至中性---悬浮于0.06%NaCl---醋酸调pH至4.5(50oC 6h)---悬浮液pH调至碱性---氯乙酸反应---羧甲基化多糖钠盐. (2)多糖均匀分散异丙醇中---加粉状NaOH--- 搅拌---氯乙酸进行非均相反应----产物 硫酸化 在质子惰性溶液(DMSO, DMF)中进行---加入一定比例氯磺酸吡啶盐---控制温度及时间---获得不同取代度的硫酸酯化多糖 可以上述两种方法结合 如: 分枝的 α-(1→3)-Glucan 先去侧链, 再羧甲基化---获得线状羧甲基葡聚糖 (显著免疫及抗肿瘤活性) ----美国专利报导 ---己应用于灵芝 灰树花 巨大口蘑 水溶性好 抗癌活性高的衍生物 多糖结构分析 化学方法 物理(光谱)方法 生物方法 ? 1.?化学方法: 全水解 甲基化 过碘酸盐氧化 Smith降解 乙酰解 部分酸水解 等 全水解 100-120oC 2-8 h ---获得单糖组成的信息 甲基化 多糖上自由羟基上”H” 置换为”CH3”成甲醚---水解得甲基化单糖---NaBH4 还原---乙酰化得alditol acetate---GC-MS分析 -----获得组成单糖键接位置 注意: 无水; 隔绝空气; IR检测是