右归胶囊对雄激素致卵障碍型不孕大鼠血清E2.docVIP

右归胶囊对雄激素致排卵障碍型不孕大鼠血清E2、T和IGF- 1水平影响研究 方云芸1 黄金珠2 马 洁2 傅春华1 (成都中医药大学中医临床学院中医妇科学专业,成都中医药大学十二桥校区研究生一公寓211室,610000; 成都中医药大学科技处) 摘要 目的: 右归胶囊对雄激素致排卵障碍性不孕大鼠血清中E2、T和IGF-1水平的影响, 以进一步探讨右归胶囊治疗不孕症的作用机理。方法:将43只9日龄SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、右归胶囊组、克罗米芬组。于颈背下注射丙酸睾丸酮建立ASR大鼠模型, 第80天开始灌服右归胶囊制剂,5周后股动脉取血,并取出新鲜卵巢组织,观察卵巢形态学,用放免法检测血中E2和T水平,用酶联免疫法检测血清中IGF- 1水平。结果: 右归胶囊能够促进卵泡生长发育及排出,并有黄体生成, 降低病理性囊性卵泡数。右归胶囊能够增加血清中E2含量(P0.05),降低血清中T的含量(P0.05),右归胶囊有降低IGF-1趋势。 结论: 右归胶囊有可能通过降低IGF–I和T,促进T转化为E2这一途径,从而促进卵泡生长发育及排出。 关键词 右归胶囊；雄激素；E2；T；IGF- 1 雄激素致排卵障碍性不孕大鼠(Androgen-induced Sterile Rats, ASR)是Barraclough[1]于1961年首次诱发成功的,但未进行深入研究。近年,俞瑾等[2-3]采用第9日龄SD雌性大鼠成功的诱发出ASR模型,ASR不孕大鼠模型的发病原因是由于外源性雄激素影响肾上腺功能,产生类似肾上腺皮质增生的雄激素T、DHA增多,后来发现ASR具有高雄激素血症、无排卵性不孕及胰岛素拮抗等表现。目前现代医学治疗排卵障碍型不孕首选药物为克罗米芬,但因其抗雌激素作用,影响受精和着床,常常出现“高排低孕”现象,且易产生过度卵巢刺激综合征和多胎等并发症[4]。中医以肾主生殖为理论依据,用补肾中药治疗排卵障碍型不孕效果显著, 具有一定的优势。古方右归胶囊是温补肾阳经典方,出自《景岳全书》,功效补肾助阳、填充精血,临床上常用于治疗月经后期或伴量少、闭经、不孕症等多种病症,中医辨证属肾阳虚精血亏虚证,该方治疗不孕症疗效确切。本实验通过探讨右归胶囊对排卵障碍不孕大鼠的E2、T和IGF-1水平影响, 进一步阐明右归胶囊治疗不孕症的作用机理。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物 健康9日龄SD系雌性大鼠,出生后母鼠哺乳至22日龄断奶,专人饲养。利用自然光照,室温维持在20℃-25℃, 动物和饲料均由成都中医药大学实验动物中心提供,SD大鼠批号为:SCXK(川) 2008- 11。 1.1.2 试剂及仪器 丙酸睾丸酮注射液(规格:1mLB25mg):天津金耀氨基酸有限公司生产,批号0707031;枸橼酸氯米芬片(克罗米芬: 50mg/片),批号A1102, Codal Synto Limited, Cyprus/赛普路斯企业生 产;雌二醇放射免疫分析药盒,批号091120,由北京北方生物技术研究所提供;睾酮放射免疫分析药盒, 批号091120,由北京北方生物技术研究所提供;胰岛素生长因子-1酶联免疫分析药盒,批号DEZ30653, 由RD公司提供;可调式移液器为美国PALL–Gelman公司生产。全自动多功能酶标仪MK3为芬兰雷勃生产。ILDZ4-018离心机为北京医用离心机厂生产。783643型光学显微镜为日本OLYMPUS公司生产;BI2004图 像分析系统仪由成都泰盟科技有限公司提供。 1.2 方法 1.2.1 模型复制及分组方法 应用SPSS1310统计软件包产生的随机数字表,将43只9日龄SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、右归胶囊组、克罗米芬对照组,共4组；参照俞瑾[2]等研究方法,于实验组和模型组颈背部皮下注射丙酸睾丸酮1125mg/只(0.05mL/只)。正常组在同等条件下饲养,未作特殊处理;第22日龄断奶,利用自然光照,室温维持在20℃左右, 并由专人在同样条件饲养.第70日龄(大鼠体重约150g左右)阴道开口。连续阴道涂片2个性周期(1个性周期为5d), 观察其阴道上皮细胞有无性周期变化,阴道上皮无性周期变化,则提示无排卵大鼠模型制作成功。 1.2.2 给药方法 从第80d开始,各组分别按如下方法给药,按临床用药,以60kg人为标准, 按照体重-剂量换算法计算大鼠给药剂量。模型组和正常组给1ml(100g.d)生理盐水灌胃;右归胶囊组给予4.5mg/mL (100mg.d)灌胃;克罗米芬组给予0.83mg/mL(100mg.d)灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃5周后股动脉取血处死大鼠。 1.2.3 检测方法 阴道脱落细胞检查:给药25天后,对大鼠进行阴道涂片。将无菌棉签用生理盐水浸湿后轻轻插入大鼠阴道内, 顺时针