毛白杨纤维素合成酶基因的克隆及其功能鉴定.pdf

摘要： 杨树是林木遗传育种和分子生物学研究的模式植物，阐明杨树纤维素生物合 成的分子机理对于林木纤维素的分子改良具有非常重要的现实意义。目前，国际 上已从欧洲颤杨克隆出七个纤维素合成酶基因，但有关这些基因的功能鉴定和相 互作用机制尚未见研究报道。为此，本研究以毛白杨次生木质部为材料，通过 段，利用转基因手段，获得了各基因的转基因植株，根据转基因植株的表型，分 析了各基因的功能及其相互作用关系，以上研究的主要结果有： 1) 以毛白杨次生木质部区域的组织为材料提取RNA，合成双链eDNA，并 框，编码区在52-2985碱基之间，长度为2925bp。 2)设计与植物表达载体pBll21多克隆位点相匹配的双酶切位点引物，将 方法分别转化烟草和杨树，获得杨树转基因植株和烟草转基因成熟植株。其中 发生了明显的变化，表现为成熟植株瘦小，次生木质部厚度和纤维细胞壁厚度减 小以及茎纤维素含量下降等特征，CCI，PR，BR片段的反义表达抑制了纤维素 的生物合成而抑制了烟草的正常生长，尤其是木质部的发育，说明PtoeesAl的基 因功能是参与次生术质部次生壁的纤维素的合成，：此外，这三个表达载体的转 基因烟草之间的表型差异不显著，说明在本试验中基因片段的长度对其反义转基 因烟草的表型影响不显著。 表达载体pBIPAl，并通过根癌农杆菌介导转化烟草和杨树，获得了杨树转基因植 株和烟草成熟植株。转基因烟草表现为植株明显变矮，叶片交小，木质部厚度． 之间的表型差异不显著。 4) PtrCesA3的同源性高达98％。并利用PA2和PA3片段分别构建了反义表达载体 pBIPA2+PA3。并用根癌农杼菌介导方法将三个表达载体分别转化烟草和杨树， 获得转基因杨树植株和烟草成熟植株。转基因成熟烟草都表现为檀株瘦小，叶片 变小，次生木质部厚度和纤维细胞壁厚度减小。3个反义表达载体抑制了转基因 树次生木质部的发育，特别是纤维细胞次生壁的纤维素的生物合成。 析，结果表明三个基因的反义转基因烟草的表型相似，各项测定指标问差异不显 著，说明三个基因编码蛋白可能是同一个纤维素合成酶复合体的不同组成部分。 反义敲除其中任何一个基因，都是阻止同～个纤维素合成酶复合体的形成，因而 和PtoCesA3的相互作用机制提供了重要的实验证据。本试验首次利用基因工程 研究林木纤维素的生物合成机理并取得了重要进展，为迸一步研究林木纤维素的 生物合成机制提供了新的研究思路和方法。 关键词g 毛白杨基因克隆 表达载体纤维素合成酶基因(CesA)遗传转化烟草 Abstract Li Genetics Chunxiu(MolecularofTree) DirectedZHANG by Liwang ShougongQI isthemodel fortree and tree plant genetics molecular Poplar breeding，and mierofibrils and to tissuesare providesffengthflexibilityplant and bio!ogy．Cellulose alsoof to chemicalindustries．Soitis greatimportancewood，paper,textile，and very to themechanismsofcellulose in this importantstudy biosynthesisplant．Inresearch，