生化第二章核酸的结构和功能.ppt

假尿嘧啶（Ψ）核苷 的糖苷键不是C-N键，而是C-C键 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 二、核酸的一级结构 定义: 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 三、DNA的功能 RNA通常以单链形式存在，但也可形成局部的双螺旋结构。 RNA分子的种类较多，分子大小变化较大，功能多样化。 RNA与蛋白质共同负责基因的表达和表达过程的调控。 　 加尾(adding tail) tRNATyr: 可以和Tyr结合的tRNA Tyr-tRNATyr : 结合了Tyr的tRNA 一、核酸的一般理化性质 核酸具有酸性； DNA分子粘度大；RNA 分子粘度小 能吸收紫外光，最大吸收峰为260nm。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 利用核酸的分子杂交，可以确定或寻找不同物种中具有同源顺序的DNA或RNA片段。 可用于核酸的定性和定量测定 各种碱基的紫外吸收光谱（pH 7.0） DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： 增色效应 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 部分解链 双链DNA 部分变性DNA的电镜图像 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 Single-stranded Double-helical 解链温度(melting temperature，Tm) 解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关， G+C的含量越高，则Tm越高。 Tm的高低还与溶液的离子浓度有关 核酸复性的速度与其基因复杂度有关 一 、信使RNA(messenger RNA) 信使RNA(messenger RNA, mRNA)是细胞内合成蛋白质的模板。 生物体内mRNA的丰度最小（2-5%）、种类最多、大小也各不相同、寿命最短。 mRNA的初级产物为不均一核RNA (hnRNA)，含有内含子(intron)和外显子(exon)。 hnRNA经过剪切后成为成熟的mRNA。 * mRNA结构特点 1. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2的羟基也是甲基化，形成帽子结构：m7GpppN-。 2. 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 帽子结构:m7GpppNm mRNA的帽结构可以与帽结合蛋白(cap binding protein，CBP)结合。 使mRNA免遭核酸酶的攻击 与帽结合蛋白复合体结合，参与mRNA和核糖体的结合，启动蛋白质的生物合成 5? pppGp… 5? GpppGp… pppG PPi 鸟苷酸转移酶 5? m7GpppGp… 甲基转移酶 SAM 帽子结构的生成 5? ppGp… 磷酸酶 Pi 5?, 5?-三磷酸结构 尾部修饰是和转录终止同时进行的过程。 poly A的有无与长短，是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。 一般真核生物在胞浆内出现的mRNA，其poly A长度为100至200个核苷酸之间，也有少数例外。 mRNA的多聚A尾在细胞内与poly(A)结合蛋白（poly(A)-binding protein，PABP）结合 编码区：mRNA分子中每三个相邻的核苷酸组成一组，在蛋白质翻译合成时代表一个特定的氨基酸，这种核苷酸三联体称为遗传密码（coden） 位于起始密码子和终止密码子之间的核苷酸序列称为开放阅读框(open reading frame, ORF)，决定了多肽链的氨基酸序列 。 功能:为蛋白质的合成提供模板 原核